痘苗DNA檢測實驗
PCR 法 斑點雜交法 Southern 雜交法 實驗方法原理 實驗材料 貼壁生長良好的單層 BS-C-1 或 HuTK-143B 細胞 重組病毒噬斑懸液 試劑、試劑盒 PBS 胰酶／EDTA 干冰／乙醇 DNA 提取緩沖液 乙酸鈉 乙醇 PCR 擴增緩沖液 引物 完全 MEM-10、ME......閱讀全文
痘苗病毒DNA提取實驗
實驗方法原理 實驗材料 純化的痘苗病毒試劑、試劑盒 Tris?Cl 溶液SDS蔗糖溶液 蛋白酶 K用 50 mmol／L Tris ? Cl 溶液平衡的苯酚1：1苯酚氯仿1 mol／L 乙酸鈉乙醇儀器、耗材 分光光度計Sorvall 離心機實驗步驟 1. 在 260 nm 處確定純化的疸苗病毒的光密
痘苗病毒DNA提取實驗
如果提取的痘苗病毒DNA用于轉染，則應在蛋白酶 K 消化和苯酚抽提后分離。具體方法見本實驗。實驗材料純化的痘苗病毒試劑、試劑盒Tris?Cl 溶液SDS蔗糖溶液蛋白酶 K用 50 mmol／L Tris ? Cl 溶液平衡的苯酚1：1苯酚氯仿1 mol／L 乙酸鈉乙醇儀器、耗材分光光度計Sorval
痘苗病毒DNA提取實驗
基本方案 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 實驗材料 純化的痘苗病毒
痘苗DNA檢測實驗
實驗方法原理 實驗材料 貼壁生長良好的單層 BS-C-1 或 HuTK-143B 細胞重組病毒噬斑懸液試劑、試劑盒 PBS胰酶／EDTA干冰／乙醇DNA 提取緩沖液乙酸鈉乙醇PCR 擴增緩沖液引物完全 MEM-10、MEM-2.5 和 MEM-5 培養基完全 MEM-10／BrdU 培養基篩選試劑4
痘苗DNA檢測實驗
PCR 法 斑點雜交法 Southern 雜交法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 實驗材料
痘苗病毒純化實驗
實驗方法原理 對于很多研究，部分純化的病毒就足夠了（進行到本實驗步驟 14）， 如果是純化 MVA 病毒，則不能用胰酶消化，也不能用 CEF 細胞或 BHK-21 細胞代替 HeLa 細胞。實驗材料 痘苗病毒儲液HeLa S3 細胞（懸浮培養）試劑、試劑盒 胰酶Tris ? Cl蔗糖儀器、耗材 旋轉
痘苗病毒純化實驗
大規模純化 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 對于很多研究，部分純化的病毒就足夠了（進行到本實驗步驟 14）， 如果是純化 MVA 病毒，則不能用胰酶消化，也不能用 CEF 細胞
痘苗病毒純化實驗
痘苗病毒通常采用蔗糖密度梯度離心的方法純化。純化的病毒可用于制備痘苗病毒 DNA ，用于不允許存在感染細胞蛋白污染的研究中，同時也可以用作高滴度的病毒儲液。對于大規模的純化（至少 1 L 的培養物），最好的方法是用 HeLa 細胞懸液作為感染的對象，而不要用單層培養的細胞。內容來源于《精編分子生物學
痘苗病毒儲液制備
實驗方法原理 實驗材料 懸浮培養的 HeLa S3 細胞痘苗病毒試劑、試劑盒 完全 MEM-10 和 MEM-2.50.25 mg ml 胰酶儀器、耗材 Sorvall H-6000A 轉子150 cm2 組織培養瓶CO2 培養箱實驗步驟 1. 用血細胞計數器對懸浮培養的 HeLa S3 細胞進行細
痘苗病毒儲液制備
實驗材料懸浮培養的 HeLa S3 細胞痘苗病毒試劑、試劑盒完全 MEM-10 和 MEM-2.50.25 mg ml 胰酶儀器、耗材Sorvall H-6000A 轉子150 cm2 組織培養瓶CO2 培養箱實驗步驟1. 用血細胞計數器對懸浮培養的 HeLa S3 細胞進行細胞計數。2. 將 5×
痘苗病毒儲液制備
基本方案 噬斑分析測定滴度 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 實驗材料 懸浮培養的 HeLa S3
痘苗DNA檢測實驗——PCR－法
除了 PCR 和 Southern 雜交可以檢測病毒 DNA 外，也可以利用 DNA 點跡雜交方法檢測在分離的噬斑中的重組病毒。本實驗主要介紹用這3種方法來檢測痘苗DNA。實驗材料貼壁生長良好的單層 BS-C-1 或 HuTK-143B 細胞重組病毒噬斑懸液試劑、試劑盒PBS胰酶／EDTA干冰／乙醇
痘苗病毒系統基因表達實驗
實驗方法原理 本方案從構建外源基因位于 PT7 和 T7 終止子之間的質粒載體開始，然后用重組質粒通過脂質體介導轉染已經被vTF7-3（可以持續表達T7 RNA聚合酶的痘苗病毒）感染的細胞。收獲后，基因產物在細胞內的表達可以用脈沖標記的方法或用「重組痘苗病毒及其產物的鑒定實驗」中敘述的方法分
痘苗病毒系統基因表達實驗
重組痘苗病毒（VTF7-3）感染后的脂質體轉染 兩種重組痘苗病毒共感染細胞 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 本方案從構建外源基因位于 PT7 和 T7 終止子之間的質
痘苗DNA檢測實驗——Southern－雜交法
實驗方法原理以前，用 HindIII 限制性內切核酸酶消化鑒定痕苗病毒 DNA。大部分的外源基因插入重組病毒的 TK 基因中，TK 基因位于 HindIII 5.1 kb 的 J 片段上。這樣在重組病毒中，如果插入片段上沒有 HindIII 內切酶位點，則J片段就會增大。如果缺乏 HindIII 5
痘苗病毒系統基因表達實驗（一）
本節介紹依賴于在哺乳動物細胞質合成噬菌體 T7 RNA 聚合酶的瞬時細胞質表達系統。首先，將感興趣的基因插入質粒中，使其位于 T7 RNA 聚合酶啟動子（PT7）的控制下。應用脂質體轉染，重組質粒進入感染了 vTF7-3 的細胞質中，而 vTF7-3 是一種能編碼噬菌體T7 RNA聚合酶的重組痘苗病
痘苗病毒系統基因表達實驗（二）
實驗方法原理含有 pT7 控制的外源基因（本實驗「重組痘苗病毒（VTF7-3）感染后的脂質體轉染」）的重組質粒，通過同源重組可整合到痘苗病毒中,并制備重組病毒儲液。將此病毒儲液與 vTF7-3 共同感染貼壁或懸浮細胞，在培養過程中，外源基因被高效的 T7 RNA 聚合酶轉錄，并在感染細胞的細胞質完成
痘苗DNA檢測實驗——斑點雜交法
實驗材料貼壁生長良好的單層 BS-C-1 或 HuTK-143B 細胞重組病毒噬斑懸液試劑、試劑盒NaOHTris ? Cl2×SSCPBS胰酶／EDTA干冰／乙醇DNA 提取緩沖液乙酸鈉乙醇PCR 擴增緩沖液引物完全 MEM-10、MEM-2.5 和 MEM-5 培養基完全 MEM-10／BrdU
痘苗病毒儲液制備——噬斑分析測定滴度
實驗方法原理經胰酶作用的系列稀釋病毒儲液常被用于感染適當的細胞系。經過幾天的培養后，吸出培養基，將細胞用結晶紫染色。由于感染細胞變縮、變圓和脫落，形成直徑 1～2 mm 顏色較淡的噬斑。實驗材料生長良好的貼壁培養的單層 BSC-1 細胞病毒儲液試劑、試劑盒0.1% 結晶紫（溶于 20% 乙醇）儀器、
痘苗載體轉染細胞實驗
CaCl2 法 DOTAP 法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 將感興趣的外源基因亞克隆到質粒轉移載體上，外源基因的兩端為痘苗病毒基因組非必需基因片段。隨后，將重組質
痘苗載體轉染細胞實驗
實驗方法原理 將感興趣的外源基因亞克隆到質粒轉移載體上，外源基因的兩端為痘苗病毒基因組非必需基因片段。隨后，將重組質粒轉染病毒感染的細胞，痘苗病毒基因組與質粒上同源的部分發生同源重組。應用適當的篩選方案，經幾輪噬斑純化，從細胞裂解物中獲得重組病毒。實驗材料 pSCll／pRB21／pSC65／pLW
痘苗載體轉染細胞實驗——DOTAP－法
實驗方法原理將感興趣的外源基因亞克隆到質粒轉移載體上，外源基因的兩端為痘苗病毒基因組非必需基因片段。隨后，將重組質粒轉染病毒感染的細胞，痘苗病毒基因組與質粒上同源的部分發生同源重組。應用適當的篩選方案，經幾輪噬斑純化，從細胞裂解物中獲得重組病毒。實驗材料pSCll／pRB21／pSC65／pLW9
HIV是DNA病毒還是RNA病毒
RNA病毒HIV：人類免疫缺陷病毒直徑約120納米，大致呈球形。病毒外膜是類脂包膜，來自宿主細胞，并嵌有病毒的蛋白gp120與gp41；gp41是跨膜蛋白，gp120位于表面，并與gp41通過非共價作用結合。向內是由蛋白p17形成的球形基質，以及蛋白p24形成的半錐形衣殼，衣殼在電鏡下呈高電子密度。
dna病毒和rna病毒的區分
這兩種病毒的遺傳物質是不一樣的，DNA病毒以DNA作為遺傳物質，而RNA病毒以RNA作為遺傳物質，其次這兩種病毒的結構也是不一樣的，DNA病毒一般是雙螺旋結構的，而RNA病毒一般是單鏈結構的，除此之外，RNA病毒的復制過程要比DNA病毒的更復雜一些，因此在治療上多半也是更困難一點，比如由艾滋病毒引起
病毒－DNA－的提取實驗——培養細胞中病毒－DNA－的提取
實驗材料細胞試劑、試劑盒裂解液TE 緩沖液儀器、耗材培養瓶EP管真空泵實驗步驟1. 貼壁培養細胞傾去培養液，加 PBS 洗 2次,加胰蛋白酶消化 (37℃, 5~10 min)后移入Ep管中，2000 r/min 離心 10 min, 棄上清液，用 PBS 懸浮細胞，離心洗滌 2~3次，用 PBS
我國艾滋病疫苗開始I期臨床試驗
據科技日報北京12月1日電 在第20個世界艾滋病日到來之際，我國艾滋病研究又傳來振奮消息：DNA—天壇痘苗復合型艾滋病疫苗于今天在北京協和醫院開始第一組志愿者的疫苗接種，這標志著我國用一種全新方法研制的艾滋病疫苗進入Ⅰ期臨床試驗。該艾滋病疫苗是在國家863計劃課題及歐盟第五框架INCO項目的資助下，
中國艾滋病疫苗進入臨床試驗階段已有31人接種
發現艾滋病31年后，首個用于未受感染人群預防的藥物在今年7月16日被美國FDA批準上市。10天后結束的第19屆世界艾滋病大會上，首位被治愈者現身，人們看到了控制艾滋病疫情的曙光。 記者昨天從北京佑安醫院獲悉，我國科技重大專項艾滋病疫苗Ⅱ期臨床試驗已于上周在該院啟動，首批31名
病毒－DNA－的提取實驗——全血細胞中病毒－DNA－的提取
實驗材料全血試劑、試劑盒裂解緩沖液 A裂解緩沖液 B蛋白酶 K儀器、耗材離心機水浴鍋實驗步驟1. 在 750μl 全血中加入等量裂解緩沖液 A,混勻， 12000 r/min 離心 30 s, 棄上清液。2. 用 1.5mL 裂解緩沖液 A 懸起沉淀，再重復離心 1次，棄上清液。3. 用 117μL
病毒－DNA－的提取實驗——拭子標本中病毒－DNA－的提取
實驗材料拭子標本試劑、試劑盒TE 緩沖液裂解液蛋白酶K儀器、耗材離心機棉簽實驗步驟預操作：將采有口腔、鼻腔或生殖道等處分泌物標本的棉簽置于 2 ml 生理鹽水中，洗下標本。若標本在 4 h 內處理，可置于室溫保存，否則需 4℃保存。1. 將生理鹽水中的標本以 2 000 r/min 離心 5 min
表達蛋白檢測實驗_點印跡法
實驗方法原理本方案用DNA點跡雜交檢測噬斑以鑒定重組病毒。像點跡雜交一樣，將感染細胞裂解物印跡在硝酸纖維素膜上（可參考「痘苗DNA檢測實驗」中「斑點雜交法」）。用可以識別外源基因表達蛋白的抗體與膜一起孵育，用125I 標記的蛋白 A 檢測結合的抗體，還可應用化學發光檢測系統，如 Amersham E