痘苗病毒DNA提取實驗
基本方案 實驗方法原理 實驗材料 純化的痘苗病毒 試劑、試劑盒 Tris?Cl 溶液 SDS 蔗糖溶液 蛋白酶 K 用 50 mmol／L Tris ? Cl 溶液平衡的苯酚 1：1苯酚氯仿 1 mol／L 乙酸鈉 乙醇 儀器、耗材 分光光度計 ......閱讀全文
痘苗病毒DNA提取實驗
基本方案 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 實驗材料 純化的痘苗病毒
痘苗病毒DNA提取實驗
如果提取的痘苗病毒DNA用于轉染，則應在蛋白酶 K 消化和苯酚抽提后分離。具體方法見本實驗。實驗材料純化的痘苗病毒試劑、試劑盒Tris?Cl 溶液SDS蔗糖溶液蛋白酶 K用 50 mmol／L Tris ? Cl 溶液平衡的苯酚1：1苯酚氯仿1 mol／L 乙酸鈉乙醇儀器、耗材分光光度計Sorval
痘苗病毒DNA提取實驗
實驗方法原理 實驗材料 純化的痘苗病毒試劑、試劑盒 Tris?Cl 溶液SDS蔗糖溶液 蛋白酶 K用 50 mmol／L Tris ? Cl 溶液平衡的苯酚1：1苯酚氯仿1 mol／L 乙酸鈉乙醇儀器、耗材 分光光度計Sorvall 離心機實驗步驟 1. 在 260 nm 處確定純化的疸苗病毒的光密
痘苗DNA檢測實驗
實驗方法原理 實驗材料 貼壁生長良好的單層 BS-C-1 或 HuTK-143B 細胞重組病毒噬斑懸液試劑、試劑盒 PBS胰酶／EDTA干冰／乙醇DNA 提取緩沖液乙酸鈉乙醇PCR 擴增緩沖液引物完全 MEM-10、MEM-2.5 和 MEM-5 培養基完全 MEM-10／BrdU 培養基篩選試劑4
痘苗DNA檢測實驗
PCR 法 斑點雜交法 Southern 雜交法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 實驗材料
痘苗病毒純化實驗
實驗方法原理 對于很多研究，部分純化的病毒就足夠了（進行到本實驗步驟 14）， 如果是純化 MVA 病毒，則不能用胰酶消化，也不能用 CEF 細胞或 BHK-21 細胞代替 HeLa 細胞。實驗材料 痘苗病毒儲液HeLa S3 細胞（懸浮培養）試劑、試劑盒 胰酶Tris ? Cl蔗糖儀器、耗材 旋轉
痘苗病毒純化實驗
痘苗病毒通常采用蔗糖密度梯度離心的方法純化。純化的病毒可用于制備痘苗病毒 DNA ，用于不允許存在感染細胞蛋白污染的研究中，同時也可以用作高滴度的病毒儲液。對于大規模的純化（至少 1 L 的培養物），最好的方法是用 HeLa 細胞懸液作為感染的對象，而不要用單層培養的細胞。內容來源于《精編分子生物學
痘苗病毒純化實驗
大規模純化 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 對于很多研究，部分純化的病毒就足夠了（進行到本實驗步驟 14）， 如果是純化 MVA 病毒，則不能用胰酶消化，也不能用 CEF 細胞
病毒－DNA－的提取實驗
實驗方法原理 實驗材料 全血試劑、試劑盒 裂解緩沖液 A裂解緩沖液 B蛋白酶 K儀器、耗材 離心機水浴鍋實驗步驟 1. 在 750μl 全血中加入等量裂解緩沖液 A,混勻， 12000 r/min 離心 30 s, 棄上清液。2. 用 1.5mL 裂解緩沖液 A 懸起沉淀，再重復離心 1次，棄上清液
病毒－DNA－的提取實驗——培養細胞中病毒－DNA－的提取
實驗材料細胞試劑、試劑盒裂解液TE 緩沖液儀器、耗材培養瓶EP管真空泵實驗步驟1. 貼壁培養細胞傾去培養液，加 PBS 洗 2次,加胰蛋白酶消化 (37℃, 5~10 min)后移入Ep管中，2000 r/min 離心 10 min, 棄上清液，用 PBS 懸浮細胞，離心洗滌 2~3次，用 PBS
痘苗DNA檢測實驗——PCR－法
除了 PCR 和 Southern 雜交可以檢測病毒 DNA 外，也可以利用 DNA 點跡雜交方法檢測在分離的噬斑中的重組病毒。本實驗主要介紹用這3種方法來檢測痘苗DNA。實驗材料貼壁生長良好的單層 BS-C-1 或 HuTK-143B 細胞重組病毒噬斑懸液試劑、試劑盒PBS胰酶／EDTA干冰／乙醇
病毒－DNA－的提取實驗——全血細胞中病毒－DNA－的提取
實驗材料全血試劑、試劑盒裂解緩沖液 A裂解緩沖液 B蛋白酶 K儀器、耗材離心機水浴鍋實驗步驟1. 在 750μl 全血中加入等量裂解緩沖液 A,混勻， 12000 r/min 離心 30 s, 棄上清液。2. 用 1.5mL 裂解緩沖液 A 懸起沉淀，再重復離心 1次，棄上清液。3. 用 117μL
病毒－DNA－的提取實驗——拭子標本中病毒－DNA－的提取
實驗材料拭子標本試劑、試劑盒TE 緩沖液裂解液蛋白酶K儀器、耗材離心機棉簽實驗步驟預操作：將采有口腔、鼻腔或生殖道等處分泌物標本的棉簽置于 2 ml 生理鹽水中，洗下標本。若標本在 4 h 內處理，可置于室溫保存，否則需 4℃保存。1. 將生理鹽水中的標本以 2 000 r/min 離心 5 min
痘苗病毒系統基因表達實驗
重組痘苗病毒（VTF7-3）感染后的脂質體轉染 兩種重組痘苗病毒共感染細胞 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 本方案從構建外源基因位于 PT7 和 T7 終止子之間的質
痘苗病毒系統基因表達實驗
實驗方法原理 本方案從構建外源基因位于 PT7 和 T7 終止子之間的質粒載體開始，然后用重組質粒通過脂質體介導轉染已經被vTF7-3（可以持續表達T7 RNA聚合酶的痘苗病毒）感染的細胞。收獲后，基因產物在細胞內的表達可以用脈沖標記的方法或用「重組痘苗病毒及其產物的鑒定實驗」中敘述的方法分
病毒－DNA－的提取實驗——新鮮或冷凍組織中病毒－DNA－的提取
實驗材料新鮮或冷凍組織試劑、試劑盒勻漿緩沖液裂解液儀器、耗材剪刀勻漿器離心機實驗步驟1. 取新鮮或剛解凍的組織去除血水和結締組織，在冰浴上剪成小碎塊。2. 將組織碎塊移入預冷的勻漿器中，按 10 ml/g 加入勻漿緩沖液，混勻，制成勻漿液。3. 將勻漿液移人 Ep 管， 5000 r/min 離心1
痘苗DNA檢測實驗——Southern－雜交法
實驗方法原理以前，用 HindIII 限制性內切核酸酶消化鑒定痕苗病毒 DNA。大部分的外源基因插入重組病毒的 TK 基因中，TK 基因位于 HindIII 5.1 kb 的 J 片段上。這樣在重組病毒中，如果插入片段上沒有 HindIII 內切酶位點，則J片段就會增大。如果缺乏 HindIII 5
痘苗病毒系統基因表達實驗（二）
實驗方法原理含有 pT7 控制的外源基因（本實驗「重組痘苗病毒（VTF7-3）感染后的脂質體轉染」）的重組質粒，通過同源重組可整合到痘苗病毒中,并制備重組病毒儲液。將此病毒儲液與 vTF7-3 共同感染貼壁或懸浮細胞，在培養過程中，外源基因被高效的 T7 RNA 聚合酶轉錄，并在感染細胞的細胞質完成
痘苗病毒系統基因表達實驗（一）
本節介紹依賴于在哺乳動物細胞質合成噬菌體 T7 RNA 聚合酶的瞬時細胞質表達系統。首先，將感興趣的基因插入質粒中，使其位于 T7 RNA 聚合酶啟動子（PT7）的控制下。應用脂質體轉染，重組質粒進入感染了 vTF7-3 的細胞質中，而 vTF7-3 是一種能編碼噬菌體T7 RNA聚合酶的重組痘苗病
痘苗DNA檢測實驗——斑點雜交法
實驗材料貼壁生長良好的單層 BS-C-1 或 HuTK-143B 細胞重組病毒噬斑懸液試劑、試劑盒NaOHTris ? Cl2×SSCPBS胰酶／EDTA干冰／乙醇DNA 提取緩沖液乙酸鈉乙醇PCR 擴增緩沖液引物完全 MEM-10、MEM-2.5 和 MEM-5 培養基完全 MEM-10／BrdU
痘苗病毒儲液制備
基本方案 噬斑分析測定滴度 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 實驗材料 懸浮培養的 HeLa S3
痘苗病毒儲液制備
實驗材料懸浮培養的 HeLa S3 細胞痘苗病毒試劑、試劑盒完全 MEM-10 和 MEM-2.50.25 mg ml 胰酶儀器、耗材Sorvall H-6000A 轉子150 cm2 組織培養瓶CO2 培養箱實驗步驟1. 用血細胞計數器對懸浮培養的 HeLa S3 細胞進行細胞計數。2. 將 5×
痘苗病毒儲液制備
實驗方法原理 實驗材料 懸浮培養的 HeLa S3 細胞痘苗病毒試劑、試劑盒 完全 MEM-10 和 MEM-2.50.25 mg ml 胰酶儀器、耗材 Sorvall H-6000A 轉子150 cm2 組織培養瓶CO2 培養箱實驗步驟 1. 用血細胞計數器對懸浮培養的 HeLa S3 細胞進行細
動物DNA提取實驗
實驗方法原理?在濃氯化鈉（1-2 mol/L）溶液中，脫氧核糖核蛋白的溶解度很大，核糖核蛋白的溶解度很小，在稀氯化鈉（0.14 mol/L）溶液中，脫氧核糖核蛋白的溶解度很小，核糖核蛋白的溶解度很大。因此，可利用不同濃度的氯化鈉溶液，將脫氧核糖核蛋白和核糖核蛋白從樣品中分別抽提出來。?將抽提得的
DNA的提取實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 酚為有效的蛋白質變性劑，并且飽和的酚與水相有效的分開．因此，在含核酸的樣品加入酚，可將樣品中的蛋白質變性后形成沉淀層，位于水相與有機相的界畫，從而達到純化核酸的目的．但酚不能完全抑制RNA酶的活性，而且酚層中含有10－15%的水
質粒DNA提取實驗
實驗方法原理?質粒多為一些雙鏈、環狀的DNA分子，是獨立于細菌染色體之外進行復制和遺傳的輔助性遺傳單位。質粒是進行分子生物學實驗操作，進行遺傳工程改良物種等工作時最主要的DNA載體。?提取質粒的基本步驟分為三步：①細菌的培養和質粒的擴增②細菌菌體的裂解③質粒DNA的純化實驗材料?大腸桿菌試劑、試劑盒
植物DNA提取實驗
實驗方法原理?真核細胞基因組在提取過程中一般有以下幾步，首先是機械法破細胞抽提；然后去除蛋白質，糖類等細胞內雜質污染；最后純化出DNA。實驗材料?幼嫩的植物材料試劑、試劑盒?液氮CTAB抽提緩沖液NaACTris-HCl EDTA氯仿異戊醇TE buffer儀器、耗材?瓷研缽離心管離心機實驗步驟 一
動物DNA提取實驗
標簽： ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?動物肝臟 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?DNA ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?提取動物肝臟DNA提取可以：（1）用于法醫學鑒定；（2）
dna提取實驗步驟
利用核酸溶解于水的性質，將組織細胞破碎后，用低鹽溶液除去RNA，將沉淀溶于水中，使DNA充分溶解于水中，離心后收集上清液。在上清中加入固體氯化鈉調節至2.6M。加入2倍體積95%乙醇，立即用攪拌法攪出。分別用66%，80%和95%乙醇以及丙銅洗滌，最后在空氣中干燥，既得DNA樣品。此法提取的DNA中
質粒DNA提取實驗
堿解法SDS堿裂解法（試劑盒提取）實驗方法原理堿裂解法是基于DNA的變性與復性差異而達到分離目的的。堿性使質粒DNA變性，再將pH值調至中性使其復性，復性的為質粒DNA，而染色體DNA不會復性，纏結成網狀物質，通過離心除去。實驗材料大腸桿菌 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?