細胞生物基本方法：特殊培養法
特殊培養法1）二倍體細胞培養法二倍體細胞培養法與一般培養相同，關鍵在于傳代，其傳代程序為：1. 吸除舊培養液注入另瓶中。2. 用溫BSS沖洗1次。3. 用0.25%溫胰蛋白酶消化，加入消化液量以僅覆蓋細胞層即可；作用1~5分鐘。4. 待細胞附著松動、細胞質邊緣卷起和間隔加大，便終止消化。為防止細胞丟失，可不必再用BSS沖洗，直接向瓶中加入培養液（新舊培養液按2：1新舊混合）。5. 輕輕反復吹打制成單個細胞懸液。6. ......閱讀全文
細胞生物基本方法：特殊培養法
特殊培養法1）二倍體細胞培養法二倍體細胞培養法與一般培養相同，關鍵在于傳代，其傳代程序為：1.??????吸除舊培養液注入另瓶中。2.??????用溫BSS沖洗1次。3.??????用0.25%溫胰蛋白酶消化，加入消化液量以僅覆蓋細胞層即可；作用1~5分鐘。4.??????待細胞附著松動、細胞質邊緣
細胞生物基本方法：常規組織培養法
常規組織培養法1）初代消化培養法1.??????準備：取各種已消毒的培養用品置于凈化臺面，紫外線消毒20分鐘。開始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。2.??????布局：點燃酒精燈，安裝吸管帽。3.??????處理組織：把組織塊置于燒杯中，用Hanks液漂洗2~3次，去除血污；如懷疑組織可能污染
特殊細胞培養實驗_懸浮培養法
實驗方法原理懸浮培養是使貼附性細胞呈懸浮狀態生長。如所培養的細胞本身屬懸浮生長類型，則無須做任何處理，在傳代時先做離心處理去除舊培養液，添加新培養液即可。但在培養貼附型細胞時，因其有貼附性，必須進行干擾使細胞不能貼附，才能形成懸浮狀態生長的細胞。實驗材料細胞儀器、耗材培養瓶攪拌器實驗步驟1. ?用大
特殊細胞培養實驗_單細胞分離培養法
實驗方法原理從理論上說各種培養細胞都可用以進行克隆培養。但實際上，初代培養細胞和有限細胞系（二倍體細胞）比較困難。無限細胞系、轉化細胞系和腫瘤細胞等則比較容易。其原因是，當體內任何細胞被置于體外培養后，對培養環境都有一個適應過程。期間細胞對營養液具有同化作用，即從培養液中攝取營養的同時，也向培養液排
細胞生物基本方法：腫瘤細胞培養
腫瘤細胞培養特殊之處在于成纖維細胞的排除（成纖維細胞常與腫瘤細胞同時混雜生長，致難以純化腫瘤組織）。有以下一些方法：1．機械刮除法2．反復帖壁法3．消化排除法4．膠原酶消化法?1）??機械刮除法1．標記：鏡下觀察，用不脫色筆在培養瓶皿的背面圈下生長腫瘤細胞的部位。2．刮除：棄掉培養液，把無菌膠刮伸入
特殊細胞培養實驗_微載體細胞培養法
實驗方法原理微載體細胞培養開始于60年代末期，最早使用離子交換凝膠作為載體，輕微攪動即可懸液在培養基中，因而可增加細胞附著的面積，達到大量培養細胞的目的。后來，根據細胞附著生長的特點，對微載體進行了改良，使其帶有電荷或其它介質，更利于細胞附著和生長。這一方法亦可用于常規量的培養，也可用于大規模的培養
細胞生物基本方法：上皮細胞培養
上皮細胞培養1）表皮細胞培養1．取材：取外科植皮或手術殘余皮膚小塊，以角化層薄者為佳，早產流產兒皮膚更好，切成0.5～1平方厘米小塊。2．EDTA處理：先置入0.02％EDTA中室溫置5分鐘。3．冷消化：換入0.25％胰蛋白酶中，置4℃過夜。4．分離：取出皮膚，用血管鉗或鑷子把表皮與真皮層分開。5．
特殊細胞培養實驗_加支持物培養法
實驗方法原理加支持物培養法是預先向培養容器中加入各種可使細胞貼附的支持物，進行培養的方法。待細胞貼附于支持物生長增殖后，可進行各種實驗和觀察。觀察時可把支持物從瓶中抽出，能做各種技術處理，是研究工作中常用的方法之一。各種對細胞無毒性的如玻璃、塑料、雞卵殼膜、膠原、硅橡膠、袋泡茶包裝紙等，均可做支持物
細胞生物基本方法：肌組織細胞培養
肌組織細胞培養1）骨骼肌細胞培養1．殺死動物，無菌取大腿肌組織，切成0.3～0.5厘米小塊。2．用不含鈣鎂離子的Hanks液配的0.25％胰蛋白酶消化，無菌紗網或紗布濾過，合成培養基加10％小牛血清培養，為促進分化可加1％的胎汁。3．細胞接種量為2×106/皿，接種在膠原或明膠的底物上能促進細胞分化
細胞生物基本方法：神經組織細胞培養
神經組織細胞培養1．獲取腦組織后，先仔細剝除腦膜和血管等纖維成分，置入Hanks液中漂洗1～2次后，置于30～50倍的Hanks液中，腦組織比較柔軟，反復吹打即可制成細胞懸液。2．為排除脂肪成分和其它碎塊，把懸液注入離心管中，在室溫直立5～10分鐘后，細胞或細胞團塊自然下沉，脂肪等雜物易漂浮于懸液表
特殊細胞培養實驗_多孔塑料培養板單細胞克隆法
實驗方法原理多孔塑料培養板克隆細胞的主要過程是1. ?制備出1~2 細胞/毫升低密度的細胞懸懸液；2. ?向多孔塑料培養板各孔中分別接種細胞懸液0.5~1 ml，則每孔平均含1 個細胞。3. ?鏡下檢測每孔所含細胞數，標記下含單細胞的孔，置溫箱培養，數日后凡在已標記的孔中有生長增殖的細胞群即為克隆細
細胞生物基本方法：結締組織類細胞培養
結締組織類細胞培養1）成纖維細胞培養用人或動物胚體為好；動物可用小鼠或雞胚，去頭和內臟，剪成小碎塊后，用胰蛋白酶消化法培養；如為人胚，可取皮膚培養。幼兒包皮是培養成纖維細胞的很好對象。?2）??巨噬細胞培養1．實驗前三天，向每只小鼠腹腔內注入無菌硫羥乙酸肉湯1ml（勿注入腸內）。2．引頸殺死動物，手
特殊細胞培養實驗_一、二倍體細胞培養法
實驗方法原理二倍體細胞來源體內二倍體細胞，也即正常細胞的初代培養。初代培養細胞成功后能始終保持二倍體細胞性狀，便成為二倍體細胞培養。二倍體細胞雖不難培養，但欲求長期呈旺盛地增殖生長、并保持二倍體細胞性狀，亦非易事。為此必須采取一些有效的措施，一是低溫凍存，二是妥善的培養方法。用反復傳代的方法以求獲得
特殊細胞培養實驗
一、二倍體細胞培養法 加支持物培養法 單細胞分離培養法 多孔塑料培養板單細胞克隆法 球體細胞培養實驗 微載體細胞培養法 懸浮培養法 ? ? ? ? ? ?
特殊細胞培養實驗
實驗方法原理 二倍體細胞來源體內二倍體細胞，也即正常細胞的初代培養。初代培養細胞成功后能始終保持二倍體細胞性狀，便成為二倍體細胞培養。二倍體細胞雖不難培養，但欲求長期呈旺盛地增殖生長、并保持二倍體細胞性狀，亦非易事。為此必須采取一些有效的措施，一是低溫凍存，二是妥善的培養方法。用反復傳代的方法以求獲
單細胞培養培養方法介紹細胞懸浮培養法
用液體培養基對保持良好的分散狀態的單個細胞或小的細胞聚集體于搖床上進行培養的方法，稱為細胞懸浮培養法(cell suspension culture)。依據培養目的不同，可分為淺層培養和深層培養。淺層培養是指使培養材料的一部分裸露于液體培養基表面，采用靜止培養的方式，適用于各種器官和組織的培養。深層
單細胞培養培養方法介紹平板培養法
將制備好的單細胞懸浮液，按照一定的細胞密度，接種于適當厚度的薄層固體培養基上進行培養的方法，稱為平板培養。等量的單細胞培養液與等量熔化(30～50℃)的瓊脂培養基(0．6%～1%)混合，迅速鋪板于培養皿中，瓊脂冷卻凝固后，細胞分布均勻地被固定在薄層(厚度大約1mm)培養基中。培養皿用石蠟膜封閉，在2
單細胞培養培養方法介紹看護培養法
有些植物細胞，一旦分離出來，不僅不能分裂、增殖，還可能死亡。看護培養法是用一塊愈傷組織來哺育單細胞，使其正常分裂和增殖的培養方法。用微量移液管或小勺，將來自懸浮培養物或愈傷組織的單細胞轉移到漂浮的定量濾紙上，濾紙下是旺盛生長的愈傷組織。幾天之后，在愈傷組織看護影響下，在一般培養基中沉寂的細胞開始分裂
特殊細胞培養實驗_球體細胞培養實驗
實驗方法原理大多數培養細胞都具有貼附在底物上生長成單層細胞的性質，如細胞長成片之后，讓細胞片與底物脫離，更換到使細胞不易貼附的底物上繼續生長時，則細胞片能卷聚成球體形，成為球體培養。實驗材料細胞試劑、試劑盒Hanks培養液胰蛋白酶儀器、耗材吸管實驗步驟1. ?瓊脂鋪底的培養瓶30 ml無菌培養瓶，每
細胞培養基本方法
= 細胞培養基本方法 =?(一)準備和安裝過濾器 (二)合成培養基的配制 (三)小牛血清的處理 (四)生長培養基的配制(五)凍存細胞的復蘇 (六)傳代 (七)凍存 (八)注意事項 (一)準備和安裝過濾器 清洗好過濾器，干燥，放入一張孔徑0.22μm的微孔濾膜，用布包裝好，
細胞培養基本方法
一)準備和安裝過濾器??清洗好過濾器，干燥，放入一張孔徑0.22μm的微孔濾膜，用布包裝好，15磅20 min進行高壓滅菌處理。 在超凈臺內打開過濾器架好，膠管一端接入濾泵再插入待除菌的液體中，出口端膠管深入到已消毒好的瓶子中。用泵過濾，過濾后要檢查濾膜是否完好無損。?(二)合成培養基的配制?1、根
細胞生物基本方法：復蘇
復蘇方法1．從液氮罐中取出安剖；有時因安剖未封嚴，浸入了液氮，取出后因安剖內液氮迅速氣化而發生爆炸，因此應帶有防護眼睛和手套。2．迅速放入盛有36℃～37℃水的搪瓷罐中，扣上蓋并不時搖動，盡快解凍。3．剪開紗布口袋，取出安剖，用70％酒精擦拭消毒后，凈化臺上打開蓋，用吸管吸出細胞懸液，裝入離心管中，
單細胞培養培養方法介紹微室培養法
人工制造一個小室，將單細胞培養在小室中的少量培養基上，使其分裂、增殖形成細胞團的方法，稱為微室培養法，亦稱為雙層蓋玻片法。其操作是將攜帶1個細胞的1滴培養基置于無菌載玻片上，并用無菌礦物油包圍培養基液滴。再分別在培養基液滴的兩側滴1滴礦物油，在每一礦物油滴上放一張蓋玻片。然后，把第三張蓋玻片放在培養
細胞生物基本方法：常用轉化細胞
幾種常用轉化細胞和轉化技術1）致癌化學物轉化細胞：轉化敘利亞地鼠胚胎細胞實驗1．取材：妊娠后第13天取材，取數個同窩胚胎，去頭和內臟，在無菌條件下剪碎至米粒大小，再用0.25％胰蛋白酶（含0.01％EDTA）37℃消化30分鐘，濾過、低速離心、吸除消化液、加入營養液、制備成細胞懸液、接種入1875p
病毒的培養方法實驗——傳代細胞培養法
實驗方法原理從人及動物某些組織，特別是腫瘤組織，經多次傳代可建立傳代細胞系，這種細胞能無限地傳代，某些傳代細胞對病毒敏感范圍較廣，可用作病毒的分離鑒定，如HeLa 細胞，Hep-2 細胞及KB 細胞。三種細胞均來自人腫瘤組織細胞，HeLa 細胞來自子宮頸癌，Hep-2 細胞來自喉癌而KB 細胞來自上
細胞培養的基本方法（二）
第四節 細胞計數及活力測定一、原理 培養的細胞在一般條件下要求有一定的密度才能生長良好，所以要進行細胞計數。計數結果以每毫升細胞數表示。細胞計數的原理和方法與血細胞計數相同。在細胞群體中總有一些因各種原因而死亡的細胞，總細胞中活細胞所占的百分比叫做細胞活力，由組織中分離細胞一般也要檢查活力，以了解分
細胞生物基本方法：凍存
凍存方法1．細胞：選對數生長期細胞，收集細胞24小時前換液一次。2．計數：按常規方法把細胞制成細胞懸液，計數，令細胞密度達5×106/ml，離心去上清，吸入離心管中。3．凍存液：先用培養液9分＋DMSO 1分（或甘油）配成10％的DMSO凍存液，按上法一滴滴加入離心管中，然后用吸管輕輕吹打令細胞重懸
病毒的培養方法實驗—組織培養法原代細胞單層培養
實驗方法原理組織培養是目前培養病毒應用最廣的一種培養方法，其優點是①經濟適用，結果正確且敏感；②較實驗動物易于控制。原代細胞單層培養法，是指動物（包括脊椎動物和無脊椎動物）的組織自機體取出后，經胰酶或其他細胞分散劑消化處理，得到單個細胞懸液。以一定量接種到特定容器中，加入細胞生長所必需的營養液，置合
特殊血培養
1．分枝桿菌血培養要求：必須用特殊的商品化分枝桿菌血培養瓶。所有培養都必須孵育至少4周。培養溫度為25~30℃。說明：雖然分枝桿菌并不需要特別復雜營養的微生物，但是為了更好地從血標本中分離出分枝桿菌，需要在肉湯培養基中補充脂肪酸（如油酸）、白蛋白和二氧化碳。一些分枝桿菌菌種（如日內瓦分枝桿菌、嗜血分
細胞分離技術是細胞培養的基本方法
從原代組織中分離細胞 將組織塊分離（散）成細胞懸液的方法有多種，最常用的是機械解離細胞法、酶學解離細胞法以及螯合劑解離細胞法。從原代組織中獲得單細胞懸液的一般方法是酶解聚。細胞暴露在酶中的時間要盡可能的短，以保持最大的活性。下列步驟可以解聚整個組織，獲得較高產量的有活性細胞。1.胰蛋白酶 (Tryp