體外哺乳類細胞基因突變(HGPRT)試驗原理及注意事項1
In vitro Mammalian Cell Gene Mutation Test【試驗原理】體外哺乳動物細胞基因突變試驗是利用培養的哺乳動物細胞作指示生物的體外遺傳毒理學試驗,可用于檢測有化學物質誘導的基因突變,適用的細胞系包括小鼠淋巴瘤細胞(L5178Y),中國倉鼠肺細胞(V79),中國倉鼠卵巢細胞(CHO),人類淋巴母細胞(TK6)等。這些細胞系,最常用的遺傳學終點是檢測胸苷激酶(TK)圖標,次黃嘌呤鳥嘌呤轉磷酸核糖激酶(HPRT/HGPRT)圖標,黃嘌呤轉磷酸核糖激酶(XPRT)基因突變。TK、HPRT/HGPRT、XPRT突變試驗可以檢測不同的遺傳事件譜。細胞在正常情況下,能產生HGPRT(次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖轉移酶),在含有6-硫代鳥嘌呤(6-thioguanine,6-TG)的選擇性培養液中,HGPRT催化產生核苷-5,-單磷酸(NMP),NMP摻入DNA中致細胞死亡。在致癌和(或)致突變物作用下,某些細胞X染......閱讀全文
體外哺乳類細胞基因突變(HGPRT)試驗原理及注意事項1
In vitro Mammalian Cell Gene Mutation Test【試驗原理】體外哺乳動物細胞基因突變試驗是利用培養的哺乳動物細胞作指示生物的體外遺傳毒理學試驗,可用于檢測有化學物質誘導的基因突變,適用的細胞系包括小鼠淋巴瘤細胞(L5178Y),中國倉鼠肺細胞(V79),中國倉鼠卵
體外哺乳類細胞基因突變(HGPRT)試驗原理及注意事項
體外哺乳動物細胞基因突變試驗是利用培養的哺乳動物細胞作指示生物的體外遺傳毒理學試驗,可用于檢測有化學物質誘導的基因突變,適用的細胞系包括小鼠淋巴瘤細胞(L5178Y),中國倉鼠肺細胞(V79),中國倉鼠卵巢細胞(CHO),人類淋巴母細胞(TK6)等。這些細胞系,常用的遺傳學終點是檢測胸苷激酶(TK)
體外哺乳類細胞基因突變(HGPRT)試驗原理及注意事項3
結果評價:陽性結果的判定:受試物組在任何一個劑量條件下的突變頻率為陰性(溶媒)對照組的3倍或3倍以上,可判定為陽性。受試物組的突變頻率增加,與陰性(溶媒)對照組比較具有統計學意義,并有劑量-反應趨勢,則可判定為陽性。受試物組在任何一個劑量條件下引起具有統計學意義的增加并有可重復性,則可判定為陽性。陰
體外哺乳類細胞基因突變(HGPRT)試驗原理及注意事項2
三、試驗步驟和觀察指標貼壁生長細胞的試驗步驟和觀察指標:1、細胞準備:將5×105 個細胞接種于直徑為10 mm平皿中,于37℃、5%二氧化碳培養箱中培養24h。2、接觸受試物:吸去培養液,PBS洗兩次,加人一定量的無血清培養液、一定濃度的受試物及S9混合物(無需代謝活化者用無血清培養液補足),置于
體外哺乳類細胞(V79/HGPRT)基因突變試驗
- 中華倉鼠肺細胞染色體突變實驗藥物毒理體外經典實驗。國家都有標準了就可以想象重要性了。自己做了一個PDF文件,方便大家收藏。中華人民共和國國家標準GB 15193.12一91體外哺乳類細胞(V79/HGPRT)基因突變試驗V79/HGPRT gene mutation test----------
體外哺乳類細胞微核試驗原理及注意事項
微核試驗是遺傳毒性研究標準組合試驗之一,在食品,化學品,藥品,農藥,飲用水等多類產品的遺傳毒性評價方面得到廣泛應用。與體內實驗相比,體外微核試驗更加簡單快速,避免動物個體差異影響,靈敏度高。體外微核試驗主要包括體外哺乳類細胞微核試驗,人外周血淋巴細胞微核試驗,肝原代細胞微核試驗等類別。體外哺乳類細胞
體外哺乳類細胞微核試驗原理及注意事項(二)
4) 陽性對照陽性對照物包括染色體斷裂劑和非整倍體劑。加S9時,斷裂劑可以選用環磷酰胺和苯并(a)芘;不加S9時,斷裂劑可以選用阿糖胞苷、絲裂霉素C、甲磺酸甲酯和4-硝基喹啉;非整倍體劑只用于不加S9時,可以選用秋水仙素和長春新堿。如果短期處理試驗方案在S9存在和不存在兩種條件下都選用斷裂劑作為陽性
體外哺乳類細胞微核試驗原理及注意事項(一)
微核試驗是遺傳毒性研究標準組合試驗之一,在食品,化學品,藥品,農藥,飲用水等多類產品的遺傳毒性評價方面得到廣泛應用。與體內實驗相比,體外微核試驗更加簡單快速,避免動物個體差異影響,靈敏度高。體外微核試驗主要包括體外哺乳類細胞微核試驗,人外周血淋巴細胞微核試驗,肝原代細胞微核試驗等類別。體外哺乳類細胞
《食品毒理學評價程序及方法標準清理建議》公開征求意見
根據《食品安全法》及其實施條例規定和《食品安全國家標準“十二五”規劃》要求,我委制定公布了《食品標準清理工作方案》,成立食品標準清理領導小組和專家組,對現行食用農產品質量安全標準、食品衛生標準、食品質量標準和有關食品的行業標準中強制執行的標準進行清理。食品標準清理工作分為食品產品、理化檢驗方法、
衛計委發布《食品添加劑使用標準》等37項食品安全國家標準
根據《中華人民共和國食品安全法》和《食品安全國家標準管理辦法》規定,經食品安全國家標準審評委員會審查通過,現發布《食品安全國家標準食品添加劑使用標準》(GB 2760-2014)等37項食品安全國家標準。其編號和名稱如下: GB 2760-2014食品安全國家標準 食品添加劑使用標準 GB
簡述單克隆抗體技術的基本原理
哺乳類細胞DNA合成可分為兩條途徑,①從頭(de novo)合成途徑,利用磷酸核糖焦磷酸和尿嘧啶,可被氨基蝶呤(A)阻斷;②補救(salvag-e)合成途徑,在次黃嘌呤磷酸核糖轉化酶( HGPRT)存在下利用次黃嘌呤(H)和胸腺嘧啶(T)。 單克隆抗體技術的流程為:脾細胞和骨髓瘤細胞在聚乙二醇
單克隆抗體技術的原理
哺乳類細胞DNA合成可分為兩條途徑,①從頭(de novo)合成途徑,利用磷酸核糖焦磷酸和尿嘧啶,可被氨基蝶呤(A)阻斷;②補救(salvag-e)合成途徑,在次黃嘌呤磷酸核糖轉化酶( HGPRT)存在下利用次黃嘌呤(H)和胸腺嘧啶(T)。 單克隆抗體技術的流程為:脾細胞和骨髓瘤細胞在聚乙二醇
單克隆抗體技術的基本原理
哺乳類細胞DNA合成可分為兩條途徑,①從頭(de novo)合成途徑,利用磷酸核糖焦磷酸和尿嘧啶,可被氨基蝶呤(A)阻斷;②補救(salvag-e)合成途徑,在次黃嘌呤磷酸核糖轉化酶( HGPRT)存在下利用次黃嘌呤(H)和胸腺嘧啶(T)。單克隆抗體技術的流程為:脾細胞和骨髓瘤細胞在聚乙二醇(PEG
關于來氟米特片的藥理毒理介紹
一、來氟米特片的藥理作用: 來氟米特是具有抗增殖活性的異噁唑類免疫抑制劑,主要抑制二氫乳清酸脫氫酶的活性從而影響活化淋巴細胞的嘧啶合成。一些體內外試驗表明本品具有抗炎作用。 二、來氟米特片的毒理研究: 1、遺傳毒性 Ames 試驗、程序外 DNA 合成試驗、HGPRT 基因突變試驗、體內
體內組織細胞的體外培養1
體內組織細胞在體外培養時,所需培養環境基本相似,但由于物種、個體遺傳背景及所處發育階段等的不同,各自要求條件有一定差別,所采取的培養技術措施亦不盡相同,現介紹個別組織細胞培養的要點如下:一、上皮細胞培養上皮細胞包括腺上皮是很多器官如肝、胰、乳腺等的功能成分,又由于癌起源于上皮組織,故上皮細胞培養特別
體外血栓形成試驗的注意事項及檢查過程
注意事項 檢查前禁忌:檢查前一天不吃過于油膩、高蛋白食物,避免大量飲酒。血液中的酒精成分會直接影響檢驗結果。體檢前一天 的晚八時以后,應禁食。 檢查時要求:抽血時應放松心情,避免因恐懼造成血管的收縮、增加采血的困難。 檢查過程 采用靜脈采血進行檢測。靜脈采血前要仔細檢查針頭是否安裝牢固,
體外血栓形成試驗的臨床意義及注意事項
臨床意義 異常結果 血液中途粘附血栓管壁而相對靜止不流動,提示可能患有冠心病、腦血栓、癌癥轉移、中風類型、心肌梗塞等疾病。 需要檢查人群 有心絞痛,有肢體發麻,運動不靈、言語不清、眩暈、視物模糊等癥狀的人群。 注意事項 檢查前禁忌:檢查前一天不吃過于油膩、高蛋白食物,避免大量飲酒。血
腫瘤細胞侵襲試驗原理和實驗步驟1
一、原理Matrigel 是從小鼠EHS肉瘤中提取的基質成分,含有LN、IV型膠原、接觸蛋白和肝素硫酸多糖,鋪在無聚乙烯吡硌烷酮的聚碳酸酯濾膜上,能在DMEM培養基中重建形成膜結構,這種膜結構與天然基質膜結構極為相似。濾膜孔徑一般為8um,而且膜孔都被Matrigel覆蓋,細胞不能自由穿過,必須分泌
關于奈韋拉平的藥理毒理介紹
在致癌性研究中,奈韋拉平增加小鼠(劑量達750 mg/kg/日)和大鼠(劑量達35 mg/kg/日)的肝腫瘤的發生率。但是,這些發現很可能與奈韋拉平是一個較強的肝酶誘導劑有關,但不會產生基因毒性。 在以下一系列體內和體外試驗基因的毒理分析中,奈韋拉平未顯示出基因突變或誘變的活性。這些試驗包括:
溶血試驗的原理及注意事項
溶血試驗是國標中規定的一種對細菌進行篩選鑒定的方法。常用于鏈球菌、弧菌、白喉桿菌等的區分鑒定。基本原理不少細菌都能產生溶血素,可以溶血平板,因此在這些細菌周圍會出現溶血環。不同細菌產生的溶血素不同,比如: 溶血素類型 溶血素類型 產氣莢膜梭菌
彗星試驗原理及注意事項(二)
樣本制備:在最后一次用測試化學品后的適當時間,對動物實施安樂死。收集選定的組織,而同時采集同一組織的一部分,放置在甲醛溶液或適當的固定劑可能組織病理學分析。彗星實驗的組織被放置在切碎緩沖液中,用冷切碎緩沖液充分沖洗以去除殘留的血液,并儲存在冰冷的切碎緩沖液中,直到處理完畢。原位灌注也可進行,如肝、腎
彗星試驗原理及注意事項(二)
彗星試驗試劑盒北京匯智泰康針對堿性彗星試驗開發彗星試驗試劑盒,本試劑盒提供了彗星試驗(單細胞凝膠電泳試驗)需要的主要試劑盒耗材,省去了細胞裂解液、細胞懸液、堿性電泳液、電溶膠配制等時間,可以直接使用,大大縮短了實驗周期;試劑盒各成分均經過嚴格的質量檢測和多次試驗驗證,符合堿性彗星試驗要求,實驗結果準
彗星試驗原理及注意事項(一)
體內堿性彗星試驗原理及注意事項體內堿性彗星試驗在化合物遺傳毒性評價中的應用日益廣泛。ICH S2(R1)已將肝臟彗星試驗列為第2個組織/終點的體內試驗;體內哺乳動物堿性彗星試驗的指導原則(TG489)也已頒布。體內堿性彗星實驗能夠檢測DNA鏈斷裂、堿性不穩定位點、不完整切除修復引起的DNA鏈的斷
溶血試驗的原理及注意事項
溶血試驗是國標中規定的一種對細菌進行篩選鑒定的方法。常用于鏈球菌、弧菌、白喉桿菌等的區分鑒定。基本原理:不少細菌都能產生溶血素,可以溶血平板,因此在這些細菌周圍會出現溶血環。不同細菌產生的溶血素不同,比如:溶血素類型溶血素類型產氣莢膜梭菌卵磷脂酶肺炎球菌肺炎溶素溶血性鏈球菌鏈球菌溶血素 O/S葡萄球
體外血栓形成試驗的注意事項有哪些
檢查前禁忌:檢查前一天不吃過于油膩、高蛋白食物,避免大量飲酒。血液中的酒精成分會直接影響檢驗結果。體檢前一天 的晚八時以后,應禁食。 檢查時要求:抽血時應放松心情,避免因恐懼造成血管的收縮、增加采血的困難。
關于致突變試驗—哺乳動物細胞基因突變試驗的介紹
哺乳動物細胞基因突變試驗—哺乳動物體外培養細胞的基因正向突變試驗常用的測試系統有小鼠淋巴瘤L5178Y細胞,中國倉鼠肺V79細胞和卵巢CHO細胞的三個基因位點的突變,即次黃嘌呤磷酸核糖轉移酶(HGPRT)、胸苷激酶(TK)及Na+/K+ATP酶(OUA)位點。HGRPT和Na+/K+ATP酶位點
體外DNA重組技術1
在體外將兩個或多個來源相同或不相同的DNA片段連接成新的重組DNA分子,再轉到特定宿主細胞中進行自主復制并表達。這是分子生物學中的基本技術。DNA重組技術的基本程序包括:(1)獲得外源DNA:外源DNA是進行DNA重組的目的DNA片段,一般采用 DNA聚合酶鏈式反應(PCR)或逆轉錄-DNA聚合酶鏈
關于舒馬曲坦的毒理研究介紹
1、遺傳毒性:舒馬曲坦Ames試驗、V79/HGPRT基因突變試驗、體外人淋巴細胞染色體畸變試驗和大鼠微核試驗結果均為陰性。 2、生殖毒性:一般生殖毒性試驗:大鼠經口給予舒馬普坦50和500mg/kg /天,可見交配次數減少和生育力降低,最大無毒性劑量為5mg/kg(以mg/m 推算,相當于人
活細胞培養法體外試驗應注意哪些?
①有的藥物在體外試驗時無致癌性,進入體內在某些酶的激活下可產生致癌作用,另外還存在著癌細胞耐藥性問題。 ②一般說,細胞培養比較適用于單質藥物測試,在用復方藥或中藥進行試驗時,由于藥物成分多,加上每批藥物之間可能存在著質和量上的差異,評價時應考慮這些因素,持客觀而謹慎態度。 ③非水溶性藥物測試
什么體外消化試驗?
體外消化試驗即是在實驗室模擬某些動物體消化道環境,用待測酶制劑進行體外消化飼料等動物食品,并測定消化前后各營養成分(干物質、蛋白質、氨基酸、有機物質、淀粉及纖維素等)的消化率,以判定酶制劑的消化效果。進行體外消化試驗有一定的難度,因為動物消化道內環境是一個動態變化的復雜環境,它受到很多因素(包括動物