PCRDGGE實驗原理和操作步驟
【實驗目的】 1．了解PCR-DGGE技術的原理。 2．了解并熟悉PCR-DGGE技術的步驟。 【實驗原理】 變性梯度凝膠電泳（DGGE）是一種根據DNA片段的熔解性質而使之分離的凝膠系統。核酸的雙螺旋結構在一定條件下可以解鏈，稱之為變性。核酸50%發生變性時的溫度稱為熔解溫度（Tm）。Tm值主要取決于DNA分子中GC含量的多少。DGGE將凝膠設置在雙重變性條件下：溫度 50~60 ℃，變性劑0~100%。當一雙鏈DNA片段通過一變性劑濃度呈梯度增加的凝膠時，此片段遷移至某一點變性劑濃度恰好相當于此段DNA的低熔點區的Tm 值，此區便開始熔解，而高熔點區仍為雙鏈。這種局部解鏈的DNA分子遷移率發生改變，達到分離的效果。Tm的改變依賴于DNA序列，即使一個堿基的替代就可引起Tm值的升高和降低。因此，DGGE可以檢測DNA分子中的任何一種單堿基的替代、移碼突變以及少于10個堿基的缺失突變。 為了提高 ......閱讀全文
PCRDGGE實驗原理和操作步驟
【實驗目的】 1．了解PCR-DGGE技術的原理。 2．了解并熟悉PCR-DGGE技術的步驟。 【實驗原理】 變性梯度凝膠電泳（DGGE）是一種根據DNA片段的熔解性質而使之分離的凝膠系統。核酸的雙螺旋結構在一定條件下可以解鏈，稱之為變性。核酸50%發生變性時的溫度稱為熔解溫度（Tm
PCRSSCP實驗原理和操作步驟
【實驗目的】1．了解PCR-SSCP技術的原理。2．了解并熟悉PCR-SSCP技術的步驟。 【實驗原理】 PCR-SSCP是1989年日本Orita等創建的篩查突變的新技術。它是一種簡單、快速、經濟的點突變篩查手段。PCR-SSCP技術的基本原理是PCR擴增后的DNA片段經變性成單鏈DNA，
cDNA的合成實驗原理和操作步驟
一、實驗目的掌握植物cDNA合成的原理和方法二、實驗原理反轉錄酶主要用于體外cDNA的合成。目前最常用的反轉錄酶(reverse transcriptase) 有SuperscriptII、M-MLV和AMV等。它們具有依賴于RNA或DNA的DNA聚合酶活性和RNaseH酶活性，可以以RNA分子
重組DNA的轉化實驗原理和操作步驟
實驗目的制備出感受態細胞，把體外重組的DNA引入受體細胞，使受體菌具有新遺傳性，并從中選擇出轉化子。實驗原理感受態就是細菌吸收轉化因子的生理狀態，只有發展為感受態的細胞才能穩定攝取外來的DNA分子。pUC18的LacZ基因區域當有DNA片段插入時，LacZ基因失活，轉化進入大腸桿菌并在含有IPTG和
Western－免疫印跡實驗原理和操作步驟
[實驗原理]Western免疫印跡（Western Blot）是將蛋白質轉移到膜上，然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白，可用相應抗體作為一抗進行檢測，對新基因的表達產物，可通過融合部分的抗體檢測。與Southern或Northern雜交方法類似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠
DNA的酶切實驗原理和操作步驟
一、實驗目的 本實驗學習、了解限制性內切酶的特性，學習根據具體目的設計適當的酶切體系并實施之。 二、實驗原理 利用限制性內切酶切割DNA是DNA重組過程中的關鍵步驟之一。成功的酶切為后續工作提供了有效的實驗材料。限制性內切酶是細菌體內限制修
霉菌的形態觀察實驗原理和操作步驟
一、實驗目的1、學習自制水浸片觀察微生物的形態；2、學習并掌握觀察霉菌形態的基本方法，了解四類常見霉菌的基本形態特征。二、基本原理霉菌可產生復什分枝的菌絲體，分基內菌絲和氣生菌絲，氣生菌絲生長到一定階段分化產生繁殖菌絲，由繁殖菌絲產生孢子。霉菌菌絲體(尤其是繁殖菌絲)及孢子的形態特征是識別不同種類霉
基因的PCR擴增實驗原理、實驗材料和操作步驟
實驗原理單鏈DNA在互補寡聚核苷酸片段的引導下，可以利用DNA聚合酶按5’→3’方向復制出互補DNA。這時單鏈DNA稱為模板DNA，寡聚核苷酸片段稱為引物（Primer），合成的互補DNA稱為產物DNA。雙鏈DNA分子經高溫變性后成為兩條單鏈DNA，它們都可作為單鏈模板DNA，在相應的引物引導下，用
植物總RNA的提取實驗原理和操作步驟
一、實驗目的通過本實驗學習從植物組織中提取RNA的方法二、實驗原理RNA是一類極易降解的分子，要得到完整的RNA，必須最大限度地抑制提取過程中內源性及外源性核糖核酸酶對RNA的降解。高濃度強變性劑異硫氰酸胍，可溶解蛋白質，破壞細胞結構，使核蛋白與核酸分離，失活RNA酶，所以RNA從細胞中釋放出來時不
免疫沉淀實驗原理、儀器試劑和操作步驟
（一）原理免疫沉淀是利用抗原抗體特異性反應純化富集目的蛋白的一種方法。抗體與細胞裂解液或表達上清中相應的蛋白結合后，再與蛋白 A／G（Protein A／G）或二抗偶聯的agaose或Sepharose珠子孵育，通過離心得到珠子－蛋白A／G或二抗－抗體－目的蛋白復合物，沉淀經洗滌后，重懸于電泳上
苯酚法提取酵母RNA實驗原理和操作步驟
（一）原理細胞內大部分RNA 均與蛋白質結合在一起，以核蛋白的形式存在。因此，提取RNA時要把RNA與蛋白質分離并除去。將細胞置于含有十二烷基磺酸鈉（Sodium dodecyl sulfate,SDS）的緩沖液中，加等體積水飽和酚，通過劇裂振蕩，然后離心形成上層水相和下層酚相。核酸溶于
MTT實驗原理和實驗步驟
MTT原理：MTT全稱為3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide，是一種黃顏色的染料。活細胞線粒體中琥珀酸脫氫酶能夠代謝還原MTT，同時在細胞色素C的作用下，生成藍色（或藍紫色）不溶于水的甲臜（Formaza
Southern－Blotting實驗原理、操作步驟和注意事項2
按先將水和DNA 按反應體系所需的量取至一1.5毫升離心管中，混勻，短暫離心至管底，放至100℃干浴中變性10 min，變性探針迅速置于冰浴上 5 min，按反應體系將反應混合液（dNTP，Random primer，Klenow ）加入變性DNA中，在同位素操作臺上，加入32P 標記的dN
免疫印跡（Western－blotting）實驗原理、試劑和操作步驟
(一)原理Western blot是一種在PVDF或硝酸纖維素（NC）膜上進行的抗原抗體反應。蛋白電泳后，將蛋白轉移至膜上，再與特異性抗體孵育，洗去游離的抗體，然后和酶標記的二抗孵育，再進行底物顯色。由于抗原抗體反應特異性好，親合力高，Western blot檢測的靈敏度較高，尤其是采用
酵母RNA的提制實驗原理、儀器試劑和操作步驟
一、目的：學習和掌握從酵母中提制RNA 的原理和方法，從而加深對核酸性質的認識。二、原理：提取和制備RNA 的首要問題是選RNA 含量高的材料。微生物是工業上大量生產核酸的原料，其中RNA 的提制以酵母最為理想，因為酵母核酸中主要是RNA（2.67～10.0%），DNA 很少（0.03～0.51
蛋白質的性質實驗原理和操作步驟1
【目的和要求】1. 學習幾種常用的鑒定蛋白質和氨基酸的方法及其原理。2. 了解蛋白質的兩性解離性質。初步學會測定蛋白質等電點的方法。3. 加深對蛋白質膠體分子穩定因素的認識，了解蛋白質的沉淀反應、變性作用的原理及其相互關系。【實驗原理】（一） 蛋白質及氨基酸的呈色反應蛋白質所含有的某些氨基酸具有特殊
Southern－Blotting實驗原理、操作步驟和注意事項1
對于大的基因組，DNA酶切圖譜憑肉眼是分辨不開的（EB染色），因為大小不等的分子呈現彌散分布，只有借助靈敏的放射性同位素（或其他化學發光物質），將靶DNA在凝膠上（膜上）的帶型通過特定的探針與之雜交，轉換成X光片上直觀的帶型，才能進行相關分析。另外如果需要鑒定或尋找與已知DNA同源的 DNA片段
SDSPAGE檢測表達蛋白實驗原理和操作步驟
1．目的 學習SDS-PAGE的基本操作，學會用SDS-PAGE檢測蛋白。 2．原理 蛋白質在加熱變性以后與SDS結合，帶上負電荷，在電場的作用下，向正極移動，結果按分子量大小排列在膠板上，含量多的蛋白帶紋粗。 3．器材 旋渦混合器，微量移液取樣器，
轉膜實驗原理與操作步驟
轉膜是把DNA從瓊脂糖凝膠中轉移到固相支持物(一般是尼龍膜)上固定，是進行各種后續研究(如 RFLP 分析，陽性克隆的篩選驗證等所有涉及分子雜交的研究)的前提。 實驗目的： 掌握 Southern blotting 的原理及操作步驟 實驗原理： 1. ?轉膜的方式： 向上的毛細管
RFLP和RAPD技術原理和操作步驟
原理：DNA分子水平上的多態性檢測技術是進行基因組研究的基礎。RFLP(Restriction Fragment Length Polymorphism,限制片段長度多態性)已被廣泛用于基因組遺傳圖譜構建、基因定位以及生物進化和分類的研究。RFLP是根據不同品種（個體）基因組的限制性內切酶的酶切位點
分子標記—AFLP原理和操作步驟
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 AFLP是通過PCR反應先把酶切片段擴增，然后把擴增的酶切片段在高分辨率的順序分析膠上進行電泳，多態性即以擴增片段的長度不同被檢測出來。實驗中酶切片段首先與含有與其共同粘末端的人工接頭連接，連接后的粘末端順序和接頭順序就作為以后
間接法的原理和操作步驟
間接法是檢測抗體最常用的方法，其原理為利用酶標記的抗體以檢測已與固相結合的受檢抗體，故稱為間接法。操作步驟如下：⑴將特異性抗原與固相載體連接，形成固相抗原：洗滌除去未結合的抗原及雜質。⑵加稀釋的受檢血清：其中的特異抗體與抗原結合，形成固相抗原抗體復合物。經洗滌后，固相載體上只留下特異性抗體。其他抗體
分子標記——AFLP原理和操作步驟
一、原理AFLP也是通過限制性內切酶片段的不同長度檢測DNA多態性的一種DNA分子標記技術。但AFLP是通過PCR反應先把酶切片段擴增,然后把擴增的酶切片段在高分辨率的順序分析膠上進行電泳,多態性即以擴增片段的長度不同被檢測出來。實驗中酶切片段首先與含有與其共同粘末端的人工接頭連接,連接后的粘末端順
分子標記——AFLP原理和操作步驟
一、原理AFLP也是通過限制性內切酶片段的不同長度檢測DNA多態性的一種DNA分子標記技術。但AFLP是通過PCR反應先把酶切片段擴增，然后把擴增的酶切片段在高分辨率的順序分析膠上進行電泳，多態性即以擴增片段的長度不同被檢測出來。實驗中酶切片段首先與含有與其共同粘末端的人工接頭連接，連接后的粘末端順
分子標記—AFLP原理和操作步驟
AFLP可用于：（1）構建遺傳連鎖圖譜；（2）利用AFLP快速鑒別與目的基因緊密連鎖的分子標記；（3）AFLP輔助的輪回選擇育種；（4）研究基因表達與調控；（5）分類和進化研究；（6）甲基化研究等。實驗方法原理AFLP是通過PCR反應先把酶切片段擴增，然后把擴增的酶切片段在高分辨率的順序分析膠上進行
Southern印跡技術原理和操作步驟
實驗原理:Southern印跡是將DNA片斷從電泳凝膠上直接轉移至膜支持物（如硝酸纖維素膜、尼龍膜）上，使DNA片斷固定的技術。先將DNA經限制性內切酶消化成一系列片段，進行瓊脂糖凝膠電泳，各片段因分子量不同而彼此分開，然后經堿處理凝膠，使DNA的片段被變性、中和并通過毛細作用在高鹽緩沖液中在原位將
聚合酶鏈反應[PCR]實驗原理和操作步驟(1)
【實驗原理】聚合酶鏈式反應（polymerase chain reaction）即PCR技術是美國Cetus公司人類遺傳研究所的科學家K.B.Mullis于1983年發明的一種體外擴增特定基因或DNA序列的方法。PCR具有很高的特異性、靈敏度，在分子生物學、基因工程研究、某些疾病的診斷以及臨床標
聚合酶鏈反應[PCR]實驗原理和操作步驟(2)
【實驗目的】了解聚合酶鏈反應（PCR）的基本原理及其影響因素，掌握PCR的基本操作過程。[儀器]PCR儀、臺式離心機、電泳儀、電泳槽、紫外檢測儀[試劑]1、引物：用去離子水配成10 μmol /μL。2、Taq聚合酶3、10×PCR反應緩沖液（加鎂離子）4、dNTPs：四種核苷酸混合物，濃度為10m
PCR擴增DNA（PCR－Amplify－DNA）實驗原理、材料和操作步驟
【實驗原理】聚合酶鏈反應（polymerasechainreaction，PCR）是一種體外 DNA擴增技術，1985年由Mullis等人創立。該技術能在幾小時的實驗操作中，將人為選定的一段DNA擴增幾百萬倍，具有靈敏度高、特異性強、操作簡便和應用廣泛等優點，目前已成為分子生物學及基因工程中極為
兔肝RNA的制備及測定實驗原理和操作步驟
實驗原理細胞內大部份RNA均與蛋白質結合在一起，并且多以核蛋白的形式存在。因此，分離制備RNA 時，首先遇到的是必須使RNA與蛋白解離，并除去蛋白質。由于RNA的種類來源和存在形式不同，所用的制備方法各異，一般常用的方法有，鹽酸胍法，去污劑法和苯酚法。其中，以苯酚法使用較為廣泛。產品純度高，適合