用于PCR的植物基因組DNA快速制備方法(一)
一種用于PCR的植物基因組DNA快速制備方法 來源:方統科技----------------------------------------------------------------------------------摘要: 本文介紹了一種用于PCR的植物基因組DNA的快速制備方法。該方法只需將少量(4~6mg)植物葉片、適量(200μl) TE緩沖液、和一粒鎢合金珠放入離心管,在組織細胞研磨器中振動5min破碎組織后,直接取1μl DNA溶液作為PCR的模板。本方法具有簡單快速、成本低、擴增效果好等優點,特別適合于大量樣品的基因型檢測。 王蘭1, 2 龍云銘2 劉耀光21 華南農業大學農學院,廣東省植物分子育種重點實驗室 2 華南農業大學生命科學學院,廣東省教育廳植物功能基因組與生物技術重點實驗室摘要:本文介紹了一種用于PCR的植物基因組DNA的快速制備方法。該方......閱讀全文
用于PCR的植物基因組DNA快速制備方法(一)
一種用于PCR的植物基因組DNA快速制備方法 來源:方統科技----------------------------------------------------------------------------------摘要: 本文介紹了一種用于PCR的植物基因組DNA的快速制備方法。該方法
用于PCR的植物基因組DNA快速制備方法(二)
2 結果與討論2.1 PCR模板DNA的快速制備本方法是將少量植物葉片在TE溶液或去離子水中,經鎢合金珠在離心管內的振蕩破碎,直接獲得DNA溶液。用多功能組織細胞研磨器(MTM-60)一次可操作60個樣品。瓊脂糖凝膠電泳表明,用TE和去離子水都可獲得分子量較大的DNA片段(圖1A)。用TE制備的DN
高通量的PCR模板植物基因組DNA制備方法(四)
2.3 ?高通量的分子標記檢測?本方法制備的DNA濃度雖然低,用96針復制器加入0.5~1 μL模板進行33~35個PCR循環就可獲得足夠濃度的產物,并不需要加入特別多的Taq酶(甚至使用量為每45~50 μL PCR反應液1 U也能擴增分子標記)。該方法已對數萬份水稻樣品進行了分子標記(S
高通量的PCR模板植物基因組DNA制備方法(一)
摘? 要:制備大量生物樣品的模板DNA用于PCR檢測是費時費人工的工作。本文介紹一種高通量的植物基因組DNA(gDNA)快速制備及其用于PCR基因型檢測的操作方法。將一小段單子葉植物苗葉片(長度約30 mm或40 mm,與96方孔板的孔深大致相同) 或一小塊(約2~4 mg)雙子葉植物葉片放入9
高通量的PCR模板植物基因組DNA制備方法(三)
將純化定量的水稻品種(93-11)基因組DNA標準樣品(0.5~8 ng)與1.0 μL本方法制備的水稻品種(02428)基因組DNA混合作為模板,用InDel 標記引物(表1)進行PCR擴增和PAGE檢測。箭頭指某反應(或2個反應之間)其02428與93-11條帶的信號值大致相等(即DNA
高通量的PCR模板植物基因組DNA制備方法(二)
1.2? 植物材料 ?1.2.1 水稻秧苗。將1.6-mL 96方孔板底部用6 mm電鉆頭打穿,或將舊96孔PCR板的底部剪去約4 mm。使用時將方孔板壓入少量泥巴。每孔放入1粒萌動的水稻種子,在自然日光下(或人工氣候箱)生長至3~4片葉。其他植物小苗也可用類似方法種植。?1.2.2 水稻大植株的鮮
植物組織pcr
直接PCR(Direct PCR)使用未純化的樣本進行PCR擴增,無需核酸純化步驟,為DNA擴增帶來前所未有的便捷。如果您研究領域涉及基因分型、轉基因、質粒檢測、基因敲除分析、DNA來源鑒定、物種鑒定、SNP分析等,請看完下面的介紹吧。 直接PCR需要的試劑 樣本裂解液 樣本裂解液可自
植物組織直接PCR
實驗概要本實驗以擬南芥葉片為試材介紹了一個不用提取DNA直接進行PCR的簡單方法。主要試劑0.25N?? NaOH0.25N??? HClNP-40緩沖液:0.5N Tris-HCI, pH8.0 ,25% NP-40實驗步驟1. 取面積約為lmm2的植物葉片放在500ul離心管中,加入40ul的0
讓基因組測序繞過PCR
?在基因組測序中,PCR擴增似乎是繞不過去的一步。然而,PCR也帶來一些問題,包括不均勻擴增,導致某些序列的比例過高。對目前的新一代測序(NGS)平臺而言,測序某些堿基組成上存在嚴重偏向的基因組區域仍是一大挑戰。在GEN雜志上,Patricia Fitzpatrick Dimond博士介紹了PCR-
植物基因組提取(CATB法)
一、實驗目的?掌握植物總DNA的抽提方法和基本原理。學習根據不同的植物和實驗要求設計和改良植物總DNA抽提方法。?二、實驗原理?通常采用機械研磨的方法破碎植物的組織和細胞,由于植物細胞勻漿含有多種酶類(尤其是氧化酶類)對DNA的抽提產生不利的影響,在抽提緩沖液中需加入抗氧化劑或強還原劑(如巰基乙醇)
植物基因組DNA的RFLP
實驗概要本實驗介紹了植物基因組DNA的RFLP多態性分析的原理及操作步驟。通過本實驗可了解不同植物或同一植物不同個體之間基因組DNA順序的差異性,掌握DNA限制性酶切片段長度多態性研究的基本方法。實驗原理DNA多態性是指DNA堿基順序的差異性。這種差異性不僅存在于不同的植物之間,也存在于同一種植物的
讓基因組測序繞過PCR擴增
在基因組測序中,PCR擴增似乎是繞不過去的一步。然而,PCR也帶來一些問題,包括不均勻擴增,導致某些序列的比例過高。對目前的新一代測序(NGS)平臺而言,測序某些堿基組成上存在嚴重偏向的基因組區域仍是一大挑戰。在GEN雜志上,Patricia Fitzpatrick Dimond博士介紹了PCR
開花植物“統治”植物界或因基因組瘦身
據英國廣播公司(BBC)1月14日報道,開花植物為什么會后來居上超越蕨類植物等,傳遍世界各地并成為最主要的陸生植物?這一問題曾讓達爾文困惑不已。現在,美國微生物學家表示,“基因組瘦身”或是開花植物遍布地球的“秘密武器”。 1898年,達爾文在《物種起源》一書中提出一個令他頗為不解的問題。他說,
昆明植物所在植物基因組印跡研究中取得進展
蓖麻基因組印跡以及其甲基化分析 基因組印記 (genetic imprinting)是一種非常重要的表觀遺傳學現象之一。在配子或合子發育過程中,來自親本的等位基因或染色體發生了差異的表觀修飾,導致了親本等位基因的差異表達(即印跡基因)。在植物中基因組印跡主要發生在被子植物的三倍體胚乳組織
植物組織制備基因組DNA實驗
氯化銫法 CTAB法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 加入一定量的異丙醇或乙醇,基因組的大分子DNA即沉淀形成纖維狀絮團飄浮其中, 可用玻棒將其取出,而小分子DNA則
迄今最古老植物基因組破譯
一個國際科研團隊對在利比亞撒哈拉沙漠考古遺址收集的新石器時代的西瓜種子進行測序,破譯了迄今最古老的植物基因組。對6000年前的西瓜種子進行測序,為西瓜的馴化提供了新線索,有助研究如何增強西瓜的抗旱、抗病蟲害能力。相關論文發表于最近的《分子生物學與進化》雜志。 科學家們普遍認為西瓜來自非洲,但究
SDS法提取植物基因組DNA
本方法由Dellaporta,Wood和Hicks(1983)的方法修改而成。其基本原理是研磨的組織細胞用熱的SDS裂解后,加入高濃度的KAc,0℃放置以除去蛋白和多糖類雜質,最后用乙醇或異丙醇沉淀。一 材料、試劑和儀器1 材料 新鮮的組織材料或-80℃凍存的材料2 試劑(1)提取緩沖液Tris-H
植物組織制備基因組DNA實驗
實驗方法原理?加入一定量的異丙醇或乙醇,基因組的大分子DNA即沉淀形成纖維狀絮團飄浮其中, 可用玻棒將其取出,而小分子DNA則只形成顆粒狀沉淀附于壁上及底部, 從而達到提取的目的。實驗材料?植物組織試劑、試劑盒?抽提緩沖液十二烷基肌氨酸鈉TE異丙醇溴化乙錠氯化銫儀器、耗材?離心機實驗步驟 ? 收取1
基因組DNA提取與PCR擴增技術
一、基因組DNA提取實驗目的基因組DNA的制備是基因分析的前提。 本實驗要求掌握基因組DNA提取的基本方法。實驗原理 DNA在生物體內是與蛋白質形成復合物的形式存在的。核酸與蛋白質之間的結合力包括離子鍵、氫鍵、范德華力等,破壞或降低這些結合力就可把核酸與蛋白分開。 DNA、RNA所含有的嘌呤環和嘧啶
數字PCR在-藥物基因組檢測的應用
? 能夠通過PCR技術實現藥物基因組的檢測,提高合理用藥水平,具有通量較高,操作簡單,儀器設備易普及等優點。? ? 數字PCR冷知識:胎兒性別不是只有B超可以看出來,一只精通數字PCR的科研狗,也可以測出來。
數字PCR技術精確檢測癌癥基因組擴增
來自斯坦福大學以及Bio-Rad的研究人員證實,數字PCR系統能夠精確測定長期存放的癌組織樣本中的癌癥基因組擴增。該研究成果發表在《Translational Medicine》雜志上。 某些拷貝數變異(如基因組擴增)可能導致特定癌基因的過表達,推動癌癥發展。靶定擴增的癌基因有望實現癌
利用CTAB法提取植物基因組DNA
一、實驗原理 CTAB(十六烷基三甲基溴化銨)是一種去污劑,可溶解細胞膜并能與核酸形成復合物,該復合物在高離子強度(0.7mol/L)的溶液里是可溶的,通過離心可將復合物同蛋白質、多糖類物質分開。在酚仿變性的條件下,去除殘留的CTAB和蛋白質等雜質,然后利用異戊醇或無水乙醇將DNA分
首個蕨類植物基因組測序完成
蕨類植物是地球上最多樣化的植物種群之一,也是僅有的沒有完成基因組測序的主要植物種群。2018年7月18日,美國康奈爾大學研究人員在《自然-植物》期刊上發表了其完成蕨類植物基因組測序的結果。 蕨類植物的基因組較大,可以擁有多達720對染色體,包含多達1480億個堿基對的DNA序列(Gb)。相比之
所有開花植物同類的基因組秘密
一個無油樟花。 據科學家們報告,代表最古老開花植物世系——一種有著乳白色花的小灌木——的單一物種的基因組序列終于被找到了,這讓人們對開花植物是如何演化的提供了關鍵性的見解。研究當今地球上植物多樣化的進化生物學家對無油樟(Amborella trichopoda)——該植物代表了被子植物
植物所等破譯構樹基因組
構樹(Broussonetia papyrifera)又稱紙皮樹、肥豬樹,為桑科構屬多年生闊葉喬木,自然分布于我國大部分地區和東南亞,是一種典型的鄉土樹種和先鋒植物。構樹雌雄異株,種子數量多,易繁殖,生長快,表型性狀和遺傳多樣性豐富,基因組緊湊,可作木本植物研究的模式材料。同時,構樹有著悠久的開
高通量植物(轉)基因檢測的利器植物材料直接PCR技術
高通量植物(轉)基因檢測的利器---植物材料直接PCR技術 摘要: 北京百泰克生物技術有限公司暨推出通用植物總RNA提取試劑盒(RP3301)成功解決了各種難提植物RNA的問題后,新近又針對高通量植物DNA的提取擴增推出了最新產品——植物直接PCR試劑盒(PR7501),該試劑盒不需要
高通量植物(轉)基因檢測的利器——植物材料直接PCR技術
摘要: ?北京百泰克生物技術有限公司暨推出通用植物總RNA提取試劑盒(RP3301)成功解決了各種難提植物RNA的問題后,新近又針對高通量植物DNA的提取擴增推出了最新產品——植物直接PCR試劑盒(PR7501),該試劑盒不需要液氮和研磨杵研磨,也不需要鋼珠破碎,更不借助任何特殊的儀器設備,方法及其
高通量植物(轉)基因檢測的利器植物材料直接PCR技術
摘要: 北京百泰克生物技術有限公司暨推出通用植物總RNA提取試劑盒(RP3301)成功解決了各種難提植物RNA的問題后,新近又針對高通量植物DNA的提取擴增推出了最新產品——植物直接PCR試劑盒(PR7501),該試劑盒不需要液氮和研磨杵研磨,也不需要鋼珠破碎,更不借助任何特殊的儀器設備,方法及
植物所發現植物細胞器基因組新的演化模式
質體和線粒體是內共生起源的細胞器,在高等植物中有不同的遺傳特征,相較于動態復雜的線粒體基因組,質體基因組的結構和序列更保守。在基部維管植物石松類卷柏科植物中,這兩種細胞器基因組表現出相似的特征,但是造成二者趨同演化的機制尚不清楚。? 中國科學院植物研究所研究員張憲春研究組從事石松類和蕨類植物的
上海植物逆境中心建立植物基因組精確定點修飾技術
中科院上海植物逆境生物學研究中心朱健康課題組近日通過模仿和改造微生物中的一種抵御外源侵染的防護機制,成功開發出一種能對植物基因組進行精確定點修飾的技術,從而使高效植物分子改良性狀成為可能。這一適用于植物的CRISPR/Cas技術就像一把剪刀可以對基因組任意感興趣的位置進行編輯,它的成功開發將革命