流式、WB、RT－PCR等實驗所需細胞數問題
1、流式所需細胞數問：我目前準備做流式，要做10 個標本，但是細胞總數不多了，我能不能把原來在100ml培養瓶培養的細胞轉移到25ml里培養，這樣把細胞重懸后，1個100ml的可以分到4個25ml里。請問這樣可以嘛？細胞數夠嘛？據說做流式至少要105次方個細胞以上才行。丁香網友漂泊認為：細胞數是夠的，請問你用流式測什么指標，用不用其他藥物處理，說得詳細點方可知你的方法妥不妥問：我要用流式測細胞周期，要加抑制細胞增殖的藥物，然后自加藥的不同時間取樣測細胞周期。這樣可行不？丁香網友漂泊認為：抑制率大概多少？那就建議您至少用50ML的培養瓶問：請教大家一個問題：因為我做流式需要做很多次，就想到用六孔板做，六孔板的一個孔內的細胞數夠不夠做一次流式用？有沒有人用過這個方法？請大家給個建議。丁香網友venchao認為：足夠了， 流式標準一個指標需要1X105。我做過，無有問題問：因為我做流式需要做很多次，就想到用六孔板做，六孔板的一個孔內的......閱讀全文
流式、WB、RT－PCR等實驗所需細胞數問題
1、流式所需細胞數問：我目前準備做流式，要做10 個標本，但是細胞總數不多了，我能不能把原來在100ml培養瓶培養的細胞轉移到25ml里培養，這樣把細胞重懸后，1個100ml的可以分到4個25ml里。請問這樣可以嘛？細胞數夠嘛？據說做流式至少要105次方個細胞以上才行。丁香網友漂泊認為：細胞數是夠的
WB實驗問題總結
答：原因有很多：a) 你的細胞中不表達這種蛋白質，換一種細胞；b) 你的細胞中的蛋白質被降解掉了，你必需加入PMSF，抑制蛋白酶活性；c) 你的抗體不能識別目標蛋白，多看看說明，看是否有問題。答：a) 有沉淀可能因為你的蛋白沒有變性完全，可以適當提高SDS 濃度，同時將樣品煮沸時間延長；b) 也不排
RTPCR－與WB結果的變化趨勢相反
RT-PCR 與WB結果的變化趨勢并不總是一致的,可以從以下幾個方面來解釋：1、基因的表達分為轉錄和翻譯兩個層面，即mRNA水平和蛋白水平。而真核基因表達的轉錄和翻譯發生的時間和位點存在時空間隔；2、在轉錄后，又會有轉錄后加工，轉錄產物的降解，翻譯，翻譯后加工及修飾好幾個層面。所以轉錄水平和翻譯水平
做完edu細胞增殖實驗的細胞，還能做WB嗎
實驗目的是什么～檢測做完實驗的該細胞蛋白量？可以啊～反正WB也是要裂解細胞取上清蛋白制樣的～只要你目的蛋白沒降解就行～
流式細胞術實驗關于細胞活性的鑒定等相關內容
一、細胞與抗體的比例：廠家推薦的抗體用量通常是假定靶細胞數量在5X105 ~1x106范圍內。有些標本沒有足夠的細胞，有些則由于細胞量大，正常濃度下的抗體相對過量或不足，導致假陽性或假陰性結果。因此，每個實驗室應根據不同于廠家推薦的方法，調整細胞與抗體用量，得到最適的細胞/抗體比例。 二、細胞
流式細胞術常見問題問答
1、流式細胞儀上的FL2-W FL2-A FL2-H 分別是做什么的？FL2-W是只檢測熒光的脈沖寬度， FL2-H是指脈沖高度。通常在做細胞周期分析時應用，用于去除粘連細胞。2、流式同型對照怎樣選擇？同型對照（Isotype Control）：使用與一抗相同種屬來源、相同亞型、相同劑量和相同的免
流式細胞術常見問題問答
1、流式細胞儀上的FL2-W FL2-A FL2-H 分別是做什么的？ FL2-W是只檢測熒光的脈沖寬度， FL2-H是指脈沖高度。通常在做細胞周期分析時應用，用于去除粘連細胞。 2、流式同型對照怎樣選擇？ 同型對照（Isotype Control）：使用與一抗相同
WB實驗小問答
? WB又稱免疫印記法.是將生物大分子物質通過不同途徑轉移到固相載體的過程。其靈敏，可達ng級，用Ecl顯色法理論上可達pg 級。方便，特異性高。今天給大家分析的是western blot實驗中那些常見的問題，這份干貨內容，請收好啦！? ? western blot 常見問題有那些？? ? 1.為什
流式細胞術實驗步驟
流式細胞術實驗：1、制備細胞懸液，計數2、分裝，按照每個EP（1.5ml）管1-2*10 6個細胞分裝，3500rpm，4度離心。3、用100ulPBS重懸，加入10ul大鼠血清封閉，4度避光30min。4、加入相應的熒光標記的抗體，混勻，避光，4度孵育30min。5、加入1mlPBS洗兩遍。6、用
關于WB實驗中蛋白樣品制備的常見問題分析
WB實驗又稱免疫印跡實驗，是根據抗原抗體的特異性結合檢測復雜樣品中的某種蛋白的方法。該法是在凝膠電泳和固相免疫測定技術基礎上發展起來的一種新的免疫生化技術，具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫測定的高特異性和敏感性，現已成為蛋白分析的一種常規技術。 對于一直都在做蛋白研究的你，在樣品制備
細胞轉染實驗所需材料和器材
（1）材料293T細胞、MyoD表達質粒和EGFP表達質粒、DMEM培養基、鏈霉素/青霉素（雙抗）、FCS（小牛血清）、PBS（磷酸鹽緩沖溶液）、胰酶/EDTA消化液、轉染試劑（TransFast）（2）器材20ul/200ul/1ml微量移液器和Tip頭酒精燈、廢液缸、血球計數板、渦旋振蕩器、恒溫
流式細胞儀檢測實驗用TUNEL流式細胞定量凋亡細胞
實驗材料要分析的細胞試劑、試劑盒 PBS95%乙醇（不是100%乙醇）冰冷多聚甲醛固定液TdT反應液TdT 生物素-dUTP混合液異硫氰酸熒光素（FITC)-鏈霉親和素（streptavidin)結合物儀器、耗材12 mm×75 mm圓底離心管配有269模型轉子的IEC 6R6000離心機（或相當的
流式細胞儀檢測實驗_用TUNEL流式細胞定量凋亡細胞
實驗材料要分析的細胞試劑、試劑盒 PBS95%乙醇（不是100%乙醇）冰冷多聚甲醛固定液TdT反應液TdT 生物素-dUTP混合液異硫氰酸熒光素（FITC)-鏈霉親和素（streptavidin)結合物儀器、耗材12 mm×75 mm圓底離心管配有269模型轉子的IEC 6R6000離心機（或相當的
流式實驗常見問題及解決方法
1.無染色/弱染色 2.高背景/非特異性染色 3.染色異常情況
實驗時間_流式細胞儀檢測細胞凋亡實驗
流式細胞儀檢測細胞凋亡可以：鑒定細胞凋亡形態；可以準確的進行凋亡細胞的計數；可以進行特異的定性分析和定量分析。實驗原理細胞凋亡時，在細胞、亞細胞和分子水平上會發生的特征性改變，這些改變包括細胞核的改變、細胞器的改變、細胞膜成分的改變和細胞形態的改變等，其中細胞核的改變最具特征性。通過流式細胞儀檢測這
流式細胞的具體實驗步驟
一 、細胞表面標記的檢測1.試劑平衡至室溫。準備：消毒臺面；穿戴工作服，帽子，口罩和手套，放置棉簽，草紙和有蓋垃圾桶（內裝有消毒劑）。2.寫編號紙并編號。1----IgG1/ IgG1/ IgG12----CD4/CD8/CD33----CD14/CD454----3.每管加相應的抗體10l/每種和
流式細胞儀實驗安全
生物學操作技術最重要的就是安全問題，在操作流程中有諸多環節存在各種安全隱患，需要謹慎操作。 （1）電安全問題：偏振板，激光供電等都是高電壓，需要特別小心。儀器內部只能由廠家人員及相關工作人員才可操作，實驗人員不得冒險操作。 （2）激光安全問題：流式細胞術的激光有相應的cover保護，不得打開
流式細胞的具體實驗步驟
一 、細胞表面標記的檢測1.試劑平衡至室溫。準備：消毒臺面；穿戴工作服，帽子，口罩和手套，放置棉簽，草紙和有蓋垃圾桶（內裝有消毒劑）。2.寫編號紙并編號。1----IgG1/ IgG1/ IgG12----CD4/CD8/CD33----CD14/CD454----3.每管加相應的抗體10l/每種和
WB實驗的那些事兒
1.二抗需和一抗宿主的物種相同（如一抗來自兔，二抗為抗兔抗體）。原因： 一抗和二抗不匹配。2.參照說明書，設置陽性對照。原因：一抗不識別檢測物種蛋白。3.每泳道蛋白上樣量不低于20~30μg，設置陽性對照。原因：抗原量不足。4.使用可逆染色劑如麗春紅S檢測轉膜效果，檢測轉膜操作是否正確。PVDF膜預
流式細胞儀檢測細胞凋亡實驗
PI單染色法 Heochst 33342/PI雙染色法 Annexin V/PI雙染色法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 主要根據細胞凋亡時在細胞、亞細胞
細胞凋亡：流式細胞儀檢測實驗
實驗方法原理 實驗材料 要分析的細胞在FACS緩沖液中試劑、試劑盒 FACS緩沖液冰冷的100%乙醇（如果細胞是抗體標記的則用70%乙醇）1 mg ml RNase A含50μg ml 二碘化丙錠（PI)的PBS儀器、耗材 流式細胞儀實驗步驟 1)凋亡刺激后，從培養液中沉淀所要分析的細胞，同樣沉淀一
流式細胞儀檢測細胞凋亡實驗
流式細胞儀檢測細胞凋亡可以： 鑒定細胞凋亡形態； 可以準確的進行凋亡細胞的計數； 可以進行特異的定性分析和定量分析。 實驗原理 細胞凋亡時，在細胞、亞細胞和分子水平上會發生的特征性改變，這些改變包括細胞核的改變、細胞器的改變、細胞膜成分的改變和細胞形態的改變等，其中細胞核的改變最具特征
細胞凋亡：流式細胞儀檢測實驗
用次GoZG1 DNA峰值計算細胞凋亡 用TUNEL流式細胞定量凋亡細胞 通過TUNEL組織切面中的凋亡細胞的原位雜交 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理
流式細胞儀檢測細胞凋亡實驗
實驗方法原理 其原理主要是根據細胞凋亡時在細胞、亞細胞和分子水平上所發生的特征性改變。這些改變包括細胞核的改變、細胞器的改變、細胞膜成分的改變和細胞形態的改變等，其中細胞核的改變最具特征性，主要包括以下幾個方面：?1. ?細胞核的改變?由于凋亡細胞核的改變，造成各種染色體熒光染料對凋亡細胞DNA可染
流式細胞儀檢測細胞凋亡實驗
實驗方法原理 其原理主要是根據細胞凋亡時在細胞、亞細胞和分子水平上所發生的特征性改變。這些改變包括細胞核的改變、細胞器的改變、細胞膜成分的改變和細胞形態的改變等，其中細胞核的改變zui具特征性，主要包括以下幾個方面：1. 細胞核的改變由于凋亡細胞核的改變，造成各種染色體熒光染料對凋亡細胞DNA可染性
流式細胞儀檢測細胞凋亡實驗
PI單染色法 Heochst 33342/PI雙染色法 Annexin V/PI雙染色法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 主要根據細胞凋亡時在細胞、亞細胞
細胞傷口愈合實驗所需材料和儀器
1.人MDA-MB-231cell(ATCC#HTB-26)2.DMEM培養基(Invitrogen#10313-021)3.胎牛血清(ATCC#30-2020)4.PBS(Invitrogen#14190-144)5.BD24孔細胞培養板(Fisher#08-772-1H;BD#353226)6.
細胞劃痕實驗的方法和所需試劑材料
材料：6孔板marker筆直尺20微升槍頭（滅菌）無血清培養基PBS準備：所有能滅菌的器械都要滅菌，直尺和marker筆在操作前紫外照射30min（超凈臺內）流程：1、先用marker筆在6孔板背后，用直尺比著，均勻地劃橫線，大約每隔0.5~1cm一道，橫穿過孔。每孔至少穿過5條線。2、在空中加入約
體細胞雜交所需實驗材料儀器介紹
1．實驗材料：煙草或其它植物無菌苗的葉片。胡蘿卜肉質根誘導的松軟愈傷組織或懸浮培養細胞。2．試劑2.1酶液及洗滌液，同植物原生質體的分離和培養實驗。2.2PEG溶液2.3高pH高鈣稀釋液2.4DPD培養基同植物原生質體的分離和培養實驗。
淺談RTPCR實驗方法中常見污染問題及對策
李軻反轉錄-聚合酶鏈反應(RT-PCR)是一種體外核酸擴增技術，它具有特異、敏感、快速、簡便、重復性好、易自動化等突出優點，能在幾個小時內完成從一根毛發、一滴血、甚至一個細胞中擴增出足量的目的產物供分析研究和檢測鑒定，所以近年來RT-PCR技術被廣泛應用于人和動物的多種傳染病早期診斷。 筆者一直