流式細胞儀標本制備1
流式細胞儀(FCM)是八十年代集單克隆抗體、熒光化學、激光、計算機等高技術發展起來的一種先進儀器,已廣泛應用于免疫學、生物化學、生物學、腫瘤學以及血液學等方面的研究和臨床常規工作。其中檢測人白細胞表面標志可對白血病、淋巴瘤作用迅速正確的診斷,對淋巴細胞群和亞群進行精確分類,還能分離純化某一群或亞群細胞。活細胞免疫熒光技術是用于FCM檢測的標本準備,染色后也能在熒光顯微鏡下進行觀察,在某些實驗條件下,活細胞免疫熒光染色后的特異性和敏感性要優于滴片固定的常規間接免疫熒光的結果。(一) 原理活細胞表面保留有較完整的抗原或受體,先用特異性鼠源性單克隆抗體與細胞表面相應抗原結合,再用熒光標記的第二抗體結合,根據所測定的熒光強度和陽性百分率即可知相應抗原的密度和分布。(二) 操作步驟制備活性高的細胞懸液(培養細胞系、外周血單個核細胞、胸腺細胞、脾細胞等均可用于本法)↓用10%FCS RPMI1640調整細胞濃度為5×106~1×107/ml......閱讀全文
流式細胞儀標本制備1
流式細胞儀(FCM)是八十年代集單克隆抗體、熒光化學、激光、計算機等高技術發展起來的一種先進儀器,已廣泛應用于免疫學、生物化學、生物學、腫瘤學以及血液學等方面的研究和臨床常規工作。其中檢測人白細胞表面標志可對白血病、淋巴瘤作用迅速正確的診斷,對淋巴細胞群和亞群進行精確分類,還能分離純化某一群或亞群細
流式細胞儀標本的制備
流式細胞儀(FCM)是八十年代集單克隆抗體、熒光化學、激光、計算機等高技術發展起來的一種先進儀器,已廣泛應用于免疫學、生物化學、生物學、腫瘤學以及血液學等方面的研究和臨床常規工作。其中檢測人白細胞表面標志可對白血病、淋巴瘤作用迅速正確的診斷,對淋巴細胞群和亞群進行精確分類,還能分離純化某一群或亞群細
流式細胞儀標本的制備
流式細胞儀(FCM)是八十年代集單克隆抗體、熒光化學、激光、計算機等高技術發展起來的一種先進儀器,已廣泛應用于免疫學、生物化學、生物學、腫瘤學以及血液學等方面的研究和臨床常規工作。其中檢測人白細胞表面標志可對白血病、淋巴瘤作用迅速正確的診斷,對淋巴細胞群和亞群進行精確分類,還能分離純化某一群或亞群細
流式細胞儀標本的制備
流式細胞儀(FCM)是八十年代集單克隆抗體、熒光化學、激光、計算機等高技術發展起來的一種先進儀器,已廣泛應用于免疫學、生物化學、生物學、腫瘤學以及血液學等方面的研究和臨床常規工作。其中檢測人白細胞表面標志可對白血病、淋巴瘤作用迅速正確的診斷,對淋巴細胞群和亞群進行精確分類,還能分離純化某一群或亞群細
流式細胞儀標本的制備
流式細胞儀(FCM)是八十年代集單克隆抗體、熒光化學、激光、計算機等高技術發展起來的一種先進儀器,已廣泛應用于免疫學、生物化學、生物學、腫瘤學以及血液學等方面的研究和臨床常規工作。其中檢測人白細胞表面標志可對白血病、淋巴瘤作用迅速正確的診斷,對淋巴細胞群和亞群進行分類,還能分離純化某一群或亞群細胞。
流式細胞儀標本制備熒光標記法
實驗方法原理活細胞免疫熒光技術是用于FCM檢測的標本準備,染色后也能在熒光顯微鏡下進行觀察,在某些實驗條件下,活細胞免疫熒光染色后的特異性和敏感性要優于滴片固定的常規間接免疫熒光的結果。活細胞表面保留有較完整的抗原或受體,先用特異性鼠源性單克隆抗體與細胞表面相應抗原結合,再用熒光標記的第二抗體結合,
活細胞免疫熒光技術-流式細胞儀標本的制備
實驗方法原理活細胞表面保留有較完整的抗原或受體,先用特異性鼠源性單克隆抗體與細胞表面相應抗原結合,再用熒光標記的第二抗體結合,根據所測定的熒光強度和陽性百分率即可知相應抗原的密度和分布。實驗材料細胞樣品試劑、試劑盒兔血清第二抗體單克隆抗體FCS-RPMI1640DPBS儀器、耗材玻璃管塑料管離心機熒
活細胞免疫熒光技術-流式細胞儀標本的制備
實驗方法原理活細胞表面保留有較完整的抗原或受體,先用特異性鼠源性單克隆抗體與細胞表面相應抗原結合,再用熒光標記的第二抗體結合,根據所測定的熒光強度和陽性百分率即可知相應抗原的密度和分布。實驗材料抗體血清試劑、試劑盒RPMI1640DPBS洗滌液固定液儀器、耗材玻璃管塑料管離心機顯微鏡實驗步驟1. ?
病毒透射電鏡病毒標本制備實驗1
懸滴標本法實驗方法原理病毒等微小顆粒標本可取其培養物經稀釋或分離提純后直接滴于附有支持膜的載網上用電鏡觀察。實驗材料病毒試劑、試劑盒稀釋液儀器、耗材透射電鏡實驗步驟懸液應盡量除去雜質如培養基殘渣,細胞碎片、糖類及各種鹽類的結晶等,這些雜質的存在會干擾染色及電鏡觀察。用該法的缺點是由于電子穿透能力很弱
正常細胞常規核型的標本制備_腫瘤細胞染色體標本制備
實驗方法原理利用腫瘤細胞無限繁殖的特點,掌握其體外生長動態,取處于對數生長期的細胞便可獲得豐富的分裂相。腫瘤細胞染色體異常包括兩個方面:1. ?結構異常 ?即在腫瘤細胞常出現的染色體畸變,包括雙著絲點染色體、環狀染色體、斷裂的染色體、染色體裂隙及微小體等。2. ?數目異常 ?由于腫瘤細胞分裂失去應有
正常細胞常規核型標本制備_人淋巴細胞染色體標本制備
實驗方法原理在淋巴母細胞分裂高峰時加入秋水仙素,破壞細胞紡錘體的形成,使細胞停止在分裂中期。然后收集細胞,低滲處理,使細胞脹大,染色體伸展。接著進行固定并除去中期分裂相中殘存的蛋白質,使染色體清晰且分散良好。再結合離心技術去掉紅細胞碎片,然后采用空氣干燥法制片獲得中期染色體標本。實驗材料HeLa細胞
人外周血染色體制備和體外培養細胞的染色體標本制備1
一、 人外周血染色體制備實驗原理 人的外周血淋巴細胞培養方法是1960年由Moorhead 提出來的。正常情況下,人外周血小淋巴細胞都處在G1期(或G0期),但在體外給予一定的條件,進行培養,經72 h就可獲得大量的有絲分裂細胞。這種取材簡易、用血量少的培養方法已被廣泛采用。在培養液中加入植
電子顯微鏡生物標本的制備及觀察實驗1
實驗方法原理電子顯微鏡是細胞生物學研究的重要工具,它以電子束為照明源,利用電子流具有波動的性質,在電磁場的作用下,電子改變前進軌跡,產生偏轉、聚焦,因而電子束透過標本后在電磁透鏡的作用下可放大成像。高速運動的電子流其波長遠比光波波長短,所以電鏡分辨率遠比光鏡高,可達0.14 nm,放大倍率可達80萬
染色體CBG標本制備
一、原理????異染色質在整個分裂間期及分裂期都是濃縮的,因而其大小較為恒定。它們通常位于著絲粒附近,或在染色體臂上呈現“團塊”,這些染色質主要由C顯帶技術呈現,故稱為C帶。CBG即C帶、Ba(OH)2、Giemsa的簡寫。C帶的根本特征是選擇性地從染色體臂抽取DNA,但在C帶區有很強抗性,仍保留大
染色體GTG標本制備
一、原理????非顯帶染色體除可根據形態分辨部分染色體,其他多數染色體難以確認,而顯帶技術則可使染色體縱向長度上出現不同帶紋,以辨認全部染色體。GTG即G帶,Trypsin(胰酶),Giemsa的簡寫。Giemsa染料是噻嗪--曙紅染料,染色體的著色有賴于在原位形成噻嗪--曙紅(2∶1)的沉淀物。著
基因擴增技術的標本制備
在將Taq DNA聚合酶引入PCR反應,并使之達到自動化之后,PCR反應已變得十分的簡單了。但是PCR樣品的采集及制備卻并非同樣簡單,而且,許多PCR的失敗都歸因于標本的制備不當。用于PCR的標本必須經適當處理后才能使用,因為標本中的許多雜質能抑制Taq DNA聚合酶的活性。另外,處理標本可使待擴增
染色體CBG標本制備實驗
基本方案 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 異染色質在整個分裂間期及分裂期都是濃縮的,因而其大小較為恒定。它們通常位于著絲粒附近,或在染色體臂上呈現“團塊”,這些染色質主要由C
胸腹水染色體標本制備
某些腫瘤細胞可脫落入胸腹水中,并繼續生長、增值。因此,由胸腹水細胞可制備較好的染色體標本。胸腹水細胞染色體分析對惡性腫瘤具有輔助診斷的價值。如分裂相多,異倍性,有結構畸變,常支持陽性診斷。二、用品和試劑同外周血染色體制備。三、操作步驟1. 新鮮胸腹水20-40毫升,以1000rpm離心10分鐘。棄去
掃描電鏡生物標本制備實驗
實驗材料病毒試劑、試劑盒無儀器、耗材掃描電鏡實驗步驟1. 標本的初步處理 待檢標本都具有柔軟而且含有大量水分的特點,在高度真空的掃描電鏡中觀察的標本都必須是干燥標本,因此,病毒標本在用掃描電鏡觀察之前都必須進行預處理并達到以下要求:(1) 標本的預處理要求:①盡可能使標本的形貌和結構保持活體時的近似
動物染色體標本的制備
秋水仙素阻斷細胞分裂法 實驗材料 蟾蜍 試劑、試劑盒 秋水仙素 生理鹽水 甲醇 冰醋
水稻根尖染色體標本制備
實驗概要? ? ? ? 水稻根尖染色體標本制備實驗步驟1.取材: 選取水稻種子,充分浸種后,將它們擺在鋪有濾紙的培養皿內,在約28℃條件下發芽培養,當胚根長至1~1.5cm時,剪下備用。2.預處理?? ? 壓片法:采用0.1%秋水仙素處理2h左右? ? 去壁低滲法可采用以下四種方法處理 ? ? ??
實驗動物組織標本的制備實驗
實驗材料 家兔豚鼠白鼠試劑、試劑盒 營養液儀器、耗材 注射器線浴槽實驗步驟 通常選用家兔、豚鼠、大白鼠或小白鼠等動物,禁食24 小時。擊頭致昏,以避免麻醉或失血對胃腸道機能的影響。立即打開腹腔,取出所需的胃、腸、膽囊等。去除附著的系膜或脂肪等組織。迅速放入充氧(或95%O2+5%CO2
水稻根尖染色體標本制備
1.取材: 選取水稻種子,充分浸種后,將它們擺在鋪有濾紙的培養皿內,在約28℃條件下發芽培養,當胚根長至1~1.5cm時,剪下備用。2.預處理?壓片法:采用0.1%秋水仙素處理2h左右去壁低滲法可采用以下四種方法處理處理方法 0.002mol/L8-羥基喹啉 α-溴萘飽和溶液 低溫(-4℃) 卡諾氏
染色體CBG標本制備實驗
實驗方法原理 異染色質在整個分裂間期及分裂期都是濃縮的,因而其大小較為恒定。它們通常位于著絲粒附近,或在染色體臂上呈現“團塊”,這些染色質主要由C顯帶技術呈現,故稱為C帶。CBG即C帶、Ba(OH)2、Giemsa的簡寫。C帶的根本特征是選擇性地從染色體臂抽取DNA,但在C帶區有很強抗性,仍保留大部
染色體提前凝集標本制備
實驗方法原理 七十年代初,由于發現M期細胞內有某種促進染色體凝集因子,它無種屬特異性,所以在細胞融合和染色體技術的基礎上,建立了制備染色體提前凝集標本的方法。即讓M期細胞與間期(I期)細胞融合,從而誘導I期細胞染色質提前濃縮成染色體。形成的這種染色體稱提前凝集的染色體(PrematurelyCond
掃描電鏡生物標本制備實驗
實驗方法原理 實驗材料 病毒試劑、試劑盒 無儀器、耗材 掃描電鏡實驗步驟 1. 標本的初步處理 待檢標本都具有柔軟而且含有大量水分的特點,在高度真空的掃描電鏡中觀察的標本都必須是干燥標本,因此,病毒標本在用掃描電鏡觀察之前都必須進行預處理并達到以下要求:(1) 標本的預處理要求:①盡可能使標
染色體GTG標本制備實驗
非顯帶染色體除可根據形態分辨部分染色體,其他多數染色體難以確認,而顯帶技術則可使染色體縱向長度上出現不同帶紋,以辨認全部染色體。GTG即G 帶,Trypsin(胰酶),Giemsa的簡寫。Giemsa染料是噻嗪——曙紅染料,染色體的著色有賴于在原位形成噻嗪--曙紅(2∶1)的沉淀物。實驗方法原理非顯
染色體GTG標本制備實驗
實驗方法原理 非顯帶染色體除可根據形態分辨部分染色體,其他多數染色體難以確認,而顯帶技術則可使染色體縱向長度上出現不同帶紋,以辨認全部染色體。GTG即G帶,Trypsin(胰酶),Giemsa的簡寫。Giemsa染料是噻嗪——曙紅染料,染色體的著色有賴于在原位形成噻嗪--曙紅(2∶1)的沉淀物。著色
動物染色體標本的制備
秋水仙素阻斷細胞分裂法 實驗材料 蟾蜍 試劑、試劑盒 秋水仙素 生理鹽水 甲醇 冰醋
動物染色體標本的制備
一、實驗目的1. 了解染色體標本制備的基本原理2. 掌握滴片法制備染色體標本的一般步驟二、實驗原理每一物種的細胞一般都具有一定數目、形狀和大小的染色體,在秋水仙素的作用下可使分裂細胞阻斷在中期,此時染色體形態最典型,然后通過低滲、固定、染色等步驟,便可在顯微鏡下呈現出其形態。三、實驗用品器具:顯微鏡