荀魯盈／谷立川合作團隊在常規DNA克隆技術取得重要進展
DNA組裝作為一種方便快捷高效的DNA克隆手段在已經在生物學領域得到廣泛的應用。各種商業化的組裝試劑盒更是層出不窮。其中，著名的Gibson組裝（NEB）是DNA組裝技術的奠基之作，因其最初被用于人造生命構建而聞名遐邇【1】。Gibson方法功能強大，一開始被用于100Kb大片段組裝。后來由于其相對于其他方法還具有方便快捷的特點逐漸被越來越多的用于生物學實驗室的日常普通克隆。但實驗室普通克隆所涉及的基因一般遠遠小于100Kb，這時候該方法的優點變成了大馬拉小車而無用武之地，而其價格昂貴的缺點則暴露無遺。這導致大部分實驗室望而生畏不得不繼續使用傳統耗時低效的克隆方法。另外，目前很多實驗室使用的In-fusion實驗方法【2,3】也并不便宜，因此，開發一種即高效而又廉價的克隆方法用實驗室常規克隆將使絕大多數生物學實驗室獲得大幅度提高實驗效率同時大幅度節約實驗經費的益處。 近日，山東大學微生物技術國家重點實驗室的荀魯盈教授和谷立......閱讀全文
荀魯盈/谷立川合作團隊在常規DNA克隆技術取得重要進展
DNA組裝作為一種方便快捷高效的DNA克隆手段在已經在生物學領域得到廣泛的應用。各種商業化的組裝試劑盒更是層出不窮。其中，著名的Gibson組裝（NEB）是DNA組裝技術的奠基之作，因其最初被用于人造生命構建而聞名遐邇【1】。Gibson方法功能強大，一開始被用于100Kb大片段組裝。后來由于其
分子克隆技術(質粒DNA和DNA插入片段的制備、連接反應...2
PCR引物決定PCR的特異性，引物的設計就顯得尤為重要。下面以已知DNA序列設計引物為例介紹設計引物應考慮的幾個方面：1、GC比值：眾所周知,堿基對中的GC之間有三條氫鍵，AT之間有兩條氫鍵，GC和AT在引物序列中的合理比例是設定PCR中退火溫度的重要依據。通常在一個引物中GC和AT各半即可。2、長
分子克隆技術(質粒DNA和DNA插入片段的制備、連接反應...1
克隆（Clone）是指通過無性繁殖過程所產生的與親代完全相同的子代群體。分子克隆（Molecular Cloning）是指由一個祖先分子復制生成的和祖先分子完全相同的分子群，發生在基因水平上的分子克隆稱基因克隆（DNA克隆）。其基本原理是：將編碼某一多肽或蛋白質的基因（外源基因）組裝到細菌質粒（
DNA片段的回收實驗——常規方法
實驗材料NA片段試劑、試劑盒純化試劑盒異丙醇儀器、耗材離心機電泳儀電泳槽取液器微量真空裝置抽濾裝置實驗步驟1. ?PAGE電泳，如EB染色的則在紫外燈下切下目的片斷，如齦染或其他非放染色的則在關下切下目的片斷。2. ?用少量脫緩沖液I將目的片斷膠條洗至一Eppendorf管中，用玻棒將凝膠搗碎，用1
常規組織樣本核酸（DNA/RNA）提取純化
20 分鐘內快速純化高品質，高產量，即用型 DNA（見圖 20）多種規格可選擇：Mini Kit 可處理 25 mg 組織，Micro Kit 可處理小于 10 mg 組織完全去除污染物和抑制劑可在 QIAcube 上進行自動化純化表1 QIAamp DNA Mini Kit純化各類樣本的核酸產量樣
克隆技術（十）
克隆多利羊1996年7月5日克隆出一只基因結構與供體完全相同的小羊“多利”（Dolly），世界輿論為之嘩然。“多利”的特別之處在于它的生命的誕生沒有精子的參與。研究人員先將一個綿羊卵細胞中的遺傳物質吸出去，使其變成空殼，然后從一只6歲的母羊身上取出一個乳腺細胞，將其中的遺傳物質注入卵細胞空殼中。這克
克隆技術（三）
克隆定義克隆的定義（一）克隆豬 科學家把人工遺傳操作動物繁殖的過程叫“克隆”，這門生物技術叫“克隆技術”，其本身的含義是無性繁殖（中國大陸的翻譯），即由同一個祖先細胞分裂繁殖而形成的純細胞系，該細胞系中每個細胞的基因彼此相同。 克隆也可以理解為復制、拷貝（港澳臺的意譯），就是從原型中產生出同樣的
克隆技術（十一）
克隆的其他綿羊:1997年，多利（Dolly）獼猴:2000年1月，Tetra，雌性豬:2000年3月，5只蘇格蘭PPL小豬；8月，Xena，雌性牛:2001年，Alpha和Beta，雄性貓:2001年底，CopyCat（CC），雌性鼠:2002年兔:2003年3-4月分別在法國和朝鮮獨立地實現；騾
克隆技術（四）
克隆的定義（二） 克隆（clone）是指通過無性生殖而產生的遺傳上均一的生物群，即具有完全相同的遺傳組成的一群細胞或者生物的個體。克隆在希臘語中是“小樹枝葉”的意思，用以指無性增殖物。現在則指個體、細胞、基因等不同水平上的無性增殖物。（1）個體水平：在植物的無性增殖中，植物的發芽、插條等由同一個體
克隆技術（十二）
應用前景奇妙的克隆克隆技術已展示出廣闊的應用前景，概括起來大致有以下四個方面：（1）培育優良畜種和生產實驗動物；（2）生產轉基因動物；（3）生產人胚胎干細胞用于細胞和組織替代療法；（4）復制瀕危的動物物種，保存和傳播動物物種資源。以下就生產轉基因動物和胚胎干細胞作簡要說明。克隆山羊轉基因動物研究是動
亞克隆技術
一、目的與原理限制性內切酶是一類能識別雙鏈DNA分子中特異核苷酸序列的DNA水解酶，該類酶是體外剪切基因片段的重要工具。實驗主要通過EcoR Ⅰ,Hind Ⅲ兩種限制性內切酶對λ DNA的單切酶、雙切酶及部分酶切的操作，掌握內切酶的實驗操作技術。二、材料與試劑1．材料：λDNA2．儀器：離心機，恒溫
克隆技術（九）
生物學應用在生物學上，克隆通常用在兩個方面：克隆一個基因或是克隆一個物種。克隆一個基因是指從一個個體中獲取一段基因（例如通過PCR的方法），然后將其插入。另外在動物界也有無性繁殖，不過多見于非脊椎動物，如原生動物的分裂繁殖、尾索類動物的出芽生殖等。但對于高級動物，在自然條件下，一般只 能進行有性繁殖
克隆技術（七）
研究成果克隆羊“多利”的誕生在全世界掀起了克隆研究熱潮，隨后，有關克隆動物的報道接連不斷。1997年3月，即“多利”誕生后近1個月的時間里，美國、中國臺灣和澳大利亞科學家分別發表了他們成功克隆猴子、豬和牛的消息。不過，他們都是采用胚胎細胞進行克隆，其意義不能與“多利”相比。同年7月，羅斯林研究所和P
克隆技術（六）
發展時期克隆技術，經歷了三個發展時期：第一個時期是微生物克隆，即用一個細菌很快復制出成千上萬個和它一模一樣的細菌，而變成一個細菌群；第二個時期是生物技術克隆，比如用遺傳基因――DNA克隆；第三個時期是動物克隆，即由一個細胞克隆成一個動物。克隆綿羊“多利”由一頭母羊的體細胞克隆而來，使用的便是動物克隆
克隆技術（十三）
克隆利弊克隆技術選自2000年11月8日《文匯報》文字我們所說的生物技術的利和弊主要指的是克隆，其利和弊是：利:1) 克隆技術可解除那些不能成為母親的女性的痛苦。2) 克隆實驗的實施促進了遺傳學的發展，為“制造”能移植于人體的動物器官開辟了前景。3) 克隆技術也可用于檢測胎兒的遺傳缺陷。將受精卵克隆
基因克隆技術
一、目的基因的獲得 目的基因是指所要研究或應用的基因，也就是將要克隆或表達的基因。獲得目的基因是分子克隆過程中最重要的一步。目前用于獲得目的基因的方法有幾種，如限制性內切酶直接分離法、文庫篩選法、體外擴增法和人工合成法等，其中限制性內切酶法直接分離目的基因和多聚酶鏈式反應（PCR）或逆轉錄-
克隆技術（二）
定義概述克隆技術? ? ? [1]克隆是英文“clone”一詞的音譯，在臺灣與港澳一般意譯為復制或轉殖，是利用生物技術由無性生殖產生與原個體有完全相同基因組之后代的過程.科學家把人工遺傳操作動物繁殖的過程叫克隆，這門生物技術叫克隆技術，其本身的含義是無性繁殖，即由同一個祖先細胞分裂繁殖而形成的純細胞
克隆技術（十四）
中國應用作為新世紀的尖端科學，克隆技術從它誕生的那一刻起就吸引了眾多世人的目光。作為世界最大的發展中國家，中國一直在致力于前沿科學的研究。據目前的狀況來看，克隆作為新興的技術在中國得到前所未有的關注而且碩果累累：1、2000年6月16日，由西北農林科技大學動物胚胎工程專家張涌教授培育的世界首例成年體
克隆技術（一）
克隆是英文"clone"或"cloning"的音譯，而英文"clone"則起源于希臘文"Klone"，原意是指以幼苗或嫩枝插條，以無性繁殖或營養繁殖的方式培育植物，如扦插和嫁接。很多植物都是通過克隆這樣的無性生殖方式從單一植株獲得大量的子代個體。在生物學上，是指選擇性地復制出一段DNA序列（分子克隆
克隆技術（八）
技術應用日本理化研究所的科學家借助用克隆動物培育克隆動物的“再克隆”技術，成功地用一只實驗鼠培育出了26代共598只實驗鼠，而且克隆的實驗鼠很健康，繁殖能力和壽命與一般實驗鼠也沒有區別。研究人員認為，這說明再克隆可以無限持續下去。該研究作為封面故事發表在了3月7日的《細胞-干細胞》(Cell Ste
克隆技術（五）
技術來源“克隆”一詞于1903年被引入園藝學，以后逐漸應用于植物學、動物學和醫學等方面。廣泛意義上的“克隆”其實是我們的日常生活中經常遇到，只是沒叫它“克隆”而已。 在自然界，有不少植物具有先天的克隆本能，如番薯、馬鈴薯、玫瑰等的插枝繁殖的植物。而動物的克隆技術，則經歷了由胚胎細胞到體細胞的發展過程
基因克隆技術
一、目的基因的獲得目的基因是指所要研究或應用的基因，也就是將要克隆或表達的基因。獲得目的基因是分子克隆過程中最重要的一步。目前用于獲得目的基因的方法有幾種，如限制性內切酶直接分離法、文庫篩選法、體外擴增法和人工合成法等，其中限制性內切酶法直接分離目的基因和多聚酶鏈式反應（PCR）或逆轉錄-多聚酶鏈式
基因克隆技術概述
基因克隆技術是分子生物學的核心技術，其目的是獲得某一基因或DNA片段的大量拷貝，用于深入分析基因的結構與功能，并可達到人為改造細胞以及物種遺傳性狀的目的。基因克隆的一項關鍵技術是DNA重組技術，它利用酶學方法將不同來源的DNA分子進行體外特異性切割，重新拼接組裝成一個新的雜合DNA分子。在此基礎上將
基因克隆技術1
一、目的基因的獲得目的基因是指所要研究或應用的基因，也就是將要克隆或表達的基因。獲得目的基因是分子克隆過程中最重要的一步。目前用于獲得目的基因的方法有幾種，如限制性內切酶直接分離法、文庫篩選法、體外擴增法和人工合成法等，其中限制性內切酶法直接分離目的基因和多聚酶鏈式反應（PCR）或逆轉錄-多聚酶鏈式
美首次用克隆技術以患者DNA制造出胰島素分泌細胞
研究人員利用32歲Ⅰ型糖尿病女患者的皮膚細胞產生了這個胚胎干細胞系的克隆 科學家在“治療性克隆”領域又實現突破。美國紐約研究人員使用克隆技術，以糖尿病患者的DNA首次制造出胰島素分泌細 胞，完美匹配病人的DNA。這是繼一周前公布的首次利用成人皮膚細胞克隆出干細胞后，一個月內第二次出現的克隆干細胞實
Cell：打破常規！發現獨特的DNA編輯功能
一種單細胞纖毛蟲物種以一種看似不可能的方式使用細胞轉錄復合體。在一項新的研究中，來自瑞士伯爾尼大學的研究人員首次詳細地描述了 “垃圾DNA”在遭受降解之前轉錄的機制。這種機制是非常巧妙的。 它聽起來像是一場設計競賽中的獲獎設計方案：當小片段信息太短而不適合放入讀取設備中時，如何讀取這些小片段信
ctDNA較常規循環DNA更短，助力液體活檢技術
理解循環腫瘤DNA和正常游離DNA在其長度上的區別或許會促進能從患者血液中檢測出腫瘤DNA的液體活檢技術。 能夠從血液中發現和診斷癌癥，并且可以監測癌癥復發性或是評估治療效果的反饋——液體活檢，這項技術一直以來因受監測靈敏性而被制約它的發展。7月18日，來自猶他大學和華盛頓大學的研究人員在《P
分子克隆技術的應用
分子克隆技術是70年代才發展起來的，它的出現和應用開辟了分子遺傳學研究的新領域，打開了人類了解、識別、分離和改造基因，創造新物種的大門。它的成就對于工業、農牧業和醫學產生深遠影響，并將為解決世界面臨的能源、食品和環保三大危機開拓一條新的出路。 在醫學方面，利用分子克隆技術已將胰島素，人、牛和雞
分子克隆技術的特點
1. 有些生物，如RNA病毒沒有DNA，只能用cDNA克隆； 2. cDNA克隆易篩選，因為cDNA庫中不包含非結構基因的克隆，而且每一cDNA克隆只含一個mRNA的信息； 3. cDNA能在細菌中表達。cDNA僅代表某一發育階段表達出來的遺傳信息，只有基因文庫才包含一個生物的完整遺傳信息。
分子克隆技術的簡介
克隆(clone,clon)一詞源于希臘文Klon，原意為樹木的枝條。在生物學中其名詞含義系指一個細胞或個體以無性繁殖的方式產生一群細胞或一群個體，在不發生突變的情況下，具有完全相同的遺傳性狀，常稱無性繁殖(細胞)系；其動詞(clone,cloned,cloning)含義指在生物體外用重組技術將