你不得不知的薄層色譜小知識！

　　怎樣提高點樣效率?

　　點樣是造成TLC定量誤差的主要來源。定量毛細管更適合較小體積的點樣；微量注射器更適合較大體積的點樣。這主要是因為微量注射器受小氣泡、溶液回爬現象的影響較大。為避免不同定量毛細管理體制的占樣誤差，建議一塊薄層板上最好用同一只定量毛細管。但應注意更換樣品時，應將毛細管用超聲波或不同極性溶課劑清洗干凈。在制備樣品時，溶樣溶劑黏度不能過高，以便于點樣；溶劑沸點過低則進樣體積易變，過高則會改變展開劑組成；對樣品溶解度過高會使樣點發生空心現象，常用的溶劑為甲醇、乙醇、丙酮。經典TLC樣點原點一般為直徑3mm點間距離1-2cm底邊距離1.5cm；HPLC樣點原點一般為直徑1mm點間距5mm底邊距1cm.

　　展開劑的選擇

　　TLC與HPLC相比，一個突出的優點就是流動相的選擇具有更大的靈活性，流動相的選擇的目的是使絕大部分樣品的Rf值位于0.1-0.7之間并達到較好的分離，與此對應的是流動相要有適當的強度和組成。流動相強度越大，溶質Rf值越大，但很可能降低分離能力；另外單一溶劑很難分離較復雜的混合物、根據相似相溶原理，要使用多元溶劑體系。一般展開劑體系選擇如下：根據分離樣品性質、薄層色譜板性質選擇一個二元溶劑體系，通過調節溶劑比例以尋求適合Rf值，適合的Rf值找到后，再尋求極性參數相同的二元溶劑體系兩個，以這三個組成為三點組成一個三角形，則可看到：三角形頂點是二元體系，邊是三元體系，三角形內是四元體系，并且極性一致，可根據幾何原理得出任一點組成，這種方法較為直觀，也較簡單。

　　理想的顯色希望靈敏度高，斑點顏色穩定、斑點與背景間的對比度好，斑點的大小及顏色的深度與物質的量成正比，在樣品組成并不完全已知的情況下，通用顯色方法顯得尤為重要。

　　通用顯色方法主要有：

　　1、紫外照射法：方便、不破壞樣品；

　　2、碘蒸氣法：通用性強，與紫外法結合靈敏度高于該兩法單獨使用；

　　3、熒光試劑：制造熒光背景，使原來紫外下無熒光物質被鑒別，有熒光物質更明顯；

　　展開劑選擇的大概原則

　　選擇展開劑一般要用混合溶劑：一般要有一種對所要展開樣品溶解度較大的溶劑，視樣品的極性，再選用相應的體系

　　極性小的用乙酸乙酯：石油醚系統

　　極性較大的用甲醇：氯仿系統

　　極性大的用甲醇：水：正丁醇：醋酸系統

　　拖尾可以加入少量氨水或冰醋酸需要在展開劑中加醋酸酸(反應體系有酸)或者加三乙胺(反應體系有堿)

　　關于展開劑：

　　分離的樣品酸性比較大，一般在展開劑中加酸加甲酸是因為該樣品是酸性的，加酸的量和該物質的酸性成正比關系，加水可能是因為你的樣品是苷類的用酸水做一下緩沖，目的就是讓斑點圓滑，不脫尾，展距良好。

　　飽和也非常重要，邊緣效應很嚴重的不妨用下端浸在展開劑中的濾紙貼在展開缸的內壁，這樣飽和效果會好一些

　　1)在層析缸口涂適量凡士林，增加密封性；；

　　2)以展開劑邊緣效應的大小，確定展開劑平衡時間的長短，一般平衡時間在30分鐘即可。

　　有機溶劑的極性，甲醇>氯仿，因此在氯仿：甲醇：氨水(10:1:0.6)這個展開劑中，如果極性略大，可適當降低甲醇比例；如極性太小，可適當增大甲醇比例。

　　氯仿：甲醇：氨水 10:1:0.6 和20：2：1.2

　　極性肯定是相同的，這有問題嗎?另外還有一個問題，這個展開劑中，甲醇用量較小，而甲醇又易揮發，容易產生邊緣效應，要特別注意展開劑的平衡和層析缸的密封。

　　不同的展開系統意思是其中至少應該有一種溶劑不同(最好是不同分類組的溶劑)，而不是比例不同。或者使用不同的固定相。

　　關于裂板：

　　板子會裂口，一則可能是因為硅膠的比例太大，二則可能是，板子要在常溫下晾干后，再在烘箱中活化。如果鋪完不久就在較高溫度下，裂口的幾率就比較高的。