用蛋白質底物進行蛋白質激酶分析實驗
試劑、試劑盒 ATP儲存液實驗步驟 一、Mg-ATP 儲存液的配制ATP 買來時通常是鈉鹽。大多數激酶需要 ATP 鎂鹽作為高效底物。有時可以用錳代替鎂。1. 20 mmol/L MgCl2 或 MgSO42. 20 mmol/L Na2-ATP以 1:1 的比例混合這兩種溶液，測 pH 值。慢慢將 pH 值調至 pH 7.4。如果出現沉淀，應繼續攪拌，并要保持 pH 值在 pH 7.4。這就配成了 10 mmol/L 的 Mg-ATP 儲存液。將溶液分成小份保存于 -20℃，可以放一年以上。二、[γ-32P] ATP 使用液的配制[γ-32P] ATP 供應商有 Amersham Int、NEN 和 ICN；通常可以買到不同比活性的 [γ-32P] ATP。適宜使用的比活性是 3000 Ci/mmol，通常剛買來時的濃度是 10 mCi/ml。Amersham’s Rerfivue [γ-32P] ATP 溶液用起......閱讀全文
用－Bradford方法測定蛋白質含量實驗
實驗方法原理 溶解蛋白質，與染料混勻，l0min 后閱讀 O.D.。實驗步驟 材料十二烷基硫酸鈉（SLS,SDS)，水溶 3.5 mmol/L 或 0.3mol/L NaOH。考馬斯亮藍 G-250, 0.12 mmol/L(0.01%)，溶于 4.7 % 乙醇和 85 % (W/V ) 磷
用－Bradford方法測定蛋白質含量實驗
實驗方法原理溶解蛋白質，與染料混勻，l0min 后閱讀 O.D.。實驗步驟材料十二烷基硫酸鈉（SLS,SDS)，水溶 3.5 mmol/L 或 0.3mol/L NaOH。考馬斯亮藍 G-250, 0.12 mmol/L(0.01%)，溶于 4.7 % 乙醇和 85 % (W/V ) 磷酸：將 10
用酸沉淀法濃縮蛋白質實驗
三氯醋酸沉淀法 丙酮沉淀法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 實驗材料 含蛋白質的樣品
用－Bradford方法測定蛋白質含量實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 溶解蛋白質，與染料混勻，l0min 后閱讀 O.D.。 實驗步驟 材料 十二烷基硫酸鈉（SLS,SDS)，水溶 3.5 mmol/L
酪蛋白激酶分析實驗_用－β酪蛋白
實驗材料β-酪蛋白（溶于水）有酪蛋白激酶活性的酶樣品試劑、試劑盒[γ-32P] ATP 溶液酪蛋白激酶反應緩沖液TCASDS-PAGE 樣品緩沖液儀器、耗材30℃ 水浴P81 磷酸纖維素膜離心管離心機實驗步驟1. 每個鑒定反應按以下比例將各反應組分加入 1.5 ml 微量離心管中：4 μl 5 ×
重組病毒的蛋白質分析實驗
實驗材料?Sf細胞試劑、試劑盒?胎牛血清PBSSDS蛋白酶抑制劑裂解緩沖液儀器、耗材?培養瓶培養箱離心機轉子水浴鍋實驗步驟 1.? 接種2.5×108 Sf9細胞于含5 ml 完全培養液/10%胎牛血清的25 cm2 培養瓶中，27℃溫育≥ 2 h。從含無血清完全培養液和重組蝕斑的1 ml
蛋白質的微量測序分析實驗
實驗材料 蛋白質試劑、試劑盒 凝膠緩沖液谷胱甘肽疏基乙酸考馬斯亮藍儀器、耗材 電泳儀微量注射器實驗步驟 1. ?制備分離膠和積層膠溶液灌制變性微型凝膠。?2. ?組裝垂直凝膠電泳裝置。?3. ?將80 ml 4×凝膠緩沖液稀釋至320 ml。將200 ml 1×凝膠緩沖 液倒入下層緩沖液槽。4. ?
蛋白質的微量測序分析實驗
本方案1 測定N-末端封閉蛋白質的內部序列 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 蛋白質 試劑、試劑盒
蛋白質的微量測序分析實驗
基本方案1 測定N-末端封閉蛋白質的內部序列 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 蛋白質
重組病毒的蛋白質分析實驗
實驗材料Sf細胞試劑、試劑盒胎牛血清PBSSDS蛋白酶抑制劑裂解緩沖液儀器、耗材培養瓶培養箱離心機轉子水浴鍋實驗步驟1. ?接種2.5x108?Sf9細胞于含5 ml 完全培養液/10%胎牛血清的25 cm2?培養瓶中，27℃溫育≥2 h。從含無血清完全培養液和重組蝕斑的1 ml 病毒貯液中取0.5
質譜檢測法如何進行蛋白質分析？
? 串聯質譜儀通常使用的都是離子模式來鑒定蛋白質的氨基酸序列。目前所有的MS/MS質譜儀都具有該功能。不過其它特殊的質譜儀也具有MS/MS功能。如果要發現蛋白質中的某個功能基團則需要用到母離子掃描功能或者中性丟失掃描功能，而這就必須用到三重四級桿質譜儀，如Q-Q-Q質譜儀，或四級桿離子阱質譜儀，如Q
質譜檢測法如何進行蛋白質分析？
MS/MS操作模式 串聯質譜儀通常使用的都是離子模式來鑒定蛋白質的氨基酸序列。目前所有的MS/MS質譜儀都具有該功能。不過其它特殊的質譜儀也具有MS/MS功能。如果要發現蛋白質中的某個功能基團則需要用到母離子掃描功能或者中性丟失掃描功能，而這就必須用到三重四級桿質譜儀，如Q-Q-Q質譜儀，或四
方案8－用－FRET－法分析體內蛋白質的相互作用實驗
實驗材料a-GFP 抗體編碼 CFP 和 YFP 的 DNA酵母細胞株系試劑、試劑盒分子生物學試劑合成的完全液體培養基酵母操作試劑編碼目標內源蛋白的 DNA 片段儀器、耗材濾光鏡裝置圖像分析軟件顯微鏡設備分子生物學和酵母操作用的標準設備實驗步驟一、實驗設計因為體內 FRET 實驗的復雜性，要獲得有效
方案9－用－GFP－嵌合體監控蛋白質蛋白質相互作用實驗
實驗材料純化的目標蛋白純化的 S65T GFP 嵌合體試劑、試劑盒非變性聚丙稀醜胺凝膠Tris-HCl 緩沖液儀器、耗材熒光成像系統垂直膠板電泳系統實驗步驟方法 1 熒光凝膠阻滯分析法方法 2 熒光極性分析法展開
蛋白質的分離純化根據蛋白質帶電性質進行分離
蛋白質在不同pH環境中帶電性質和電荷數量不同，可將其分開。1、電泳法各種蛋白質在同一pH條件下，因分子量和電荷數量不同而在電場中的遷移率不同而得以分開。值得重視的是等電聚焦電泳，這是利用一種兩性電解質作為載體，電泳時兩性電解質形成一個由正極到負極逐漸增加的pH梯度，當帶一定電荷的蛋白質在其中泳動時，
蛋白質的微量測序分析實驗2
測定N-末端封閉蛋白質的內部序列實驗材料蛋白質試劑、試劑盒乙酸NaOH麗春紅染料三氟乙酸儀器、耗材纖維素膜離心管濾膜實驗步驟1. ?電泳分離目標蛋白并轉移到硝酸纖維素膜。?2. ?將硝酸纖維素膜放入盛有50 ml 含0.1%麗春紅S料的1%乙酸水溶液的經酸洗的petri 玻璃培養皿。輕輕搖動1 mi
蛋白質的微量測序分析實驗1
驗材料蛋白質試劑、試劑盒凝膠緩沖液谷胱甘肽疏基乙酸考馬斯亮藍儀器、耗材電泳儀微量注射器實驗步驟1. ?制備分離膠和積層膠溶液灌制變性微型凝膠。?2. ?組裝垂直凝膠電泳裝置。?3. ?將80 ml 4×凝膠緩沖液稀釋至320 ml。將200 ml 1×凝膠緩沖 液倒入下層緩沖液槽。4. ?剩余的1×
擬南芥葉綠體蛋白質組學分析實驗
試劑、試劑盒 HEPES-KOH山梨醇抗壞血酸維生素 C半胱氨酸PF-Percoll儀器、耗材 濃縮離心設備實驗步驟 建議在短日照條件下培養材料以誘導營養生長，并在照光的早期收取材料以提高獲得完整葉綠體的產率。所以試劑應在收集材料之前準備好，并連同其他一些設備，如離心機轉頭及離心管等在冰箱或冰上冷卻
蛋白質序列分析和結構預測實驗
實驗步驟1. ?人脂聯素蛋白質序列的檢索（1）調用Internet瀏覽器并在其地址欄輸入Entrez網址（http://www.ncbi.nlm.nih.gov/Entrez）；（2）在Search后的選擇欄中選擇protein；（3）在輸入欄輸入homo sapiens adiponectin；（
蛋白質序列分析和結構預測實驗
蛋白質序列分析和結構預測實驗 ? ? ? ? ? ? 實驗步驟 1. ?人脂聯素蛋白質序列的檢索（1）調用Internet瀏覽器并在其
擬南芥葉綠體蛋白質組學分析實驗
試劑、試劑盒HEPES-KOH ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?山梨醇 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?
擬南芥葉綠體蛋白質組學分析實驗
試劑、試劑盒HEPES-KOH山梨醇抗壞血酸維生素 C半胱氨酸PF-Percoll儀器、耗材濃縮離心設備實驗步驟建議在短日照條件下培養材料以誘導營養生長，并在照光的早期收取材料以提高獲得完整葉綠體的產率。所以試劑應在收集材料之前準備好，并連同其他一些設備，如離心機轉頭及離心管等在冰箱或冰上冷卻至 0
蛋白質序列分析和結構預測實驗
實驗步驟 1. ?人脂聯素蛋白質序列的檢索（1）調用Internet瀏覽器并在其地址欄輸入Entrez網址（http://www.ncbi.nlm.nih.gov/Entrez）；（2）在Search后的選擇欄中選擇protein；（3）在輸入欄輸入homo sapiens adiponectin；
蛋白質定量實驗_考馬斯亮藍蛋白質濃度分析法
實驗方法原理蛋白質分子中的芳香族氨基酸酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸殘基，其化學結構中的共軛雙鍵，具有吸收紫外光的特性，吸收高峰在280 nm處，蛋白質溶液的吸光度(A280)與蛋白質含量成正比關系，可作為樣品中蛋白質定量測定。該方法簡便、靈敏、快速，且樣品用量少且可回收，低濃度的鹽類也不干擾測定，但測定
蛋白質按功能進行分類
蛋白質按功能進行分類，可分為活性蛋白質和非活性蛋白質。活性蛋白質是指在生命過程中一切有活性的蛋白質，如酶、激素蛋白質等。非活性蛋白質是指對生物體起保護作用或支持作用的蛋白質，如膠原蛋白、角蛋白等。
蛋白質組氨酸激酶的基本信息
中文名稱蛋白質組氨酸激酶英文名稱protein histidine kinase定 義蛋白質-組氨酸-近-激酶(protein-histidine-pros-kinase，編號EC 2.7.3.11)和蛋白質-組氨酸-遠-激酶(protein-histidine-tele-kinase，編號EC
蛋白質組氨酸激酶的基本信息
中文名稱蛋白質組氨酸激酶英文名稱protein histidine kinase定 義蛋白質-組氨酸-近-激酶(protein-histidine-pros-kinase，編號EC 2.7.3.11)和蛋白質-組氨酸-遠-激酶(protein-histidine-tele-kinase，編號EC
用克隆化基因在體外合成的蛋白質分析DNA蛋白質相互...
用克隆化基因在體外合成的蛋白質分析DNA-蛋白質相互作用實驗實驗方法原理 實驗材料 含有所需結合位點的質粒DNA試劑、試劑盒 35S標記的蛋白5×結合緩沖液10 mg mL poly (dl-dC) ? poly (dl-dC)或其他的大分子載體 DNA加樣緩沖液45%甲醇 10%乙酸EN3HANC
蛋白質染色實驗
實驗材料 蛋白質試劑、試劑盒 聚丙烯酰胺凝膠固定液染色液脫色液儀器、耗材 濾紙培養箱實驗步驟 1. ?將聚丙烯酰胺凝膠放在塑料容器并以3~5倍體積的固定液覆蓋，在旋轉搖床中緩慢揺動2 h。?2. ?傾去固定液，以考馬斯亮藍染色液覆蓋凝膠，并緩慢搖動4 h。3. ?傾去染色液，用約50 ml 固定液沖
蛋白質合成實驗
實驗步驟 材料無菌細胞培養，如 1X104～ 1X106 個細胞，24 孔板3H-亮氨酸。無血淸培養基中 2 MBq /ml (～50uCi/ml) (特異活性并不重要，因為它將由培養基中的亮氨酸濃度決定）非無菌SLS 或 SDS，1% (35m mol/L ) 溶于 0 .3 mol/L NaOH