蔗糖梯度純化法實驗
實驗材料：染色質粗品試劑、試劑盒：聚碳酸酯離心管儀器、耗材：Dounce 勻漿器實驗步驟：準備兩種 18ml，濃度分別為 20% 和 60% 的蔗糖分離緩沖液（聚胺，水相或己二醇法的緩沖液），然后以線性形式加到一 50 ml 的聚碳酸酯離心管中，用梯度生成器形成沿離心管的密度梯度。2. 將染色質粗品溶液輕輕地加到梯度上，用帶吊桶式轉頭的 JS-13 ( Beckman Instruments ) 或 HB-4 ( Sorvall) 離心機在 2500 g 離心 15 分鐘。3. 3 ml —份輕輕地從梯度頂部取出樣品，取少量用相差顯微鏡檢查染色質的存在情況。4. 收集含染色體的組分在 3000 g 離心 10 分鐘。5. 用大約為起始染色體粗品溶液體積 1/30 的分離緩沖液重懸浮染色體，繼續下一步研究。......閱讀全文
通過CsCl－等密度梯度離心純化λ噬菌體顆粒實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 CsCl 等密度梯度離心用于制備最高純度的感染性 λ 噬菌體顆粒，它沒有任何細菌核酸的污染。從這種噬菌體顆粒中提取的 DNA 可用作 DNA 測序的模板、亞克隆至質粒載體和產生用于原位雜交的探針。這種方法第二個優點是，由它所
超速離心法純化病毒實驗——等密度梯度離心
實驗方法原理離心過程中?CsCl?隨離心力而下沉，形成連續梯度，上部密度小而下部密度大，離心管內病毒懸液中的病毒和細胞碎片隨其密度的大小而下沉或上浮到相等密度梯層中實驗材料待純化的病毒試劑、試劑盒CsCl儀器、耗材離心機實驗步驟在每毫升病毒懸液中，加入?CsCl?約?1 g,?混勻，4℃以?40 0
氯化銫溴化乙錠梯度平衡離心法純化閉環DNA實驗（一）
用含氯化銫和溴化乙錠的懸浮密度梯度離心法分離質粒和染色體 DNA 的方法，取決于與線狀 DNA 和閉環 DNA 結合的溴化乙錠的量的差異。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三版」黃培堂等譯。連續梯度法實驗方法原理用含氯化銫和溴化乙錠的懸浮密度梯度離心法分離質粒和染色體 DNA 的方法，取決于與線狀 DN
吸附法純化病毒實驗_葡聚糖柱層析法
實驗材料待純化的病毒試劑、試劑盒磷酸鹽緩沖液儀器、耗材分光光度計實驗步驟(1) 經初步純化濃縮后的材料，通過葡聚糖 G150 或 G200 柱層析。(2)?用 0. 02~0. 15mol/L 磷酸緩沖液 (pH 7. 0~7. 6) 洗脫，洗脫時適宜流速為 2~5ml/(cm2?h) 。分部收集，
疏水作用層析法純化蛋白質實驗
疏水相互作用層析是以介質疏水基團和蛋白質疏水區域間的親和作用為基礎的。疏水力是浸在一種極性液體（如水）中的非極性物質的排斥力。胞膜蛋白都具有一個明顯的疏水區域以錨定在膜上。可溶性蛋白質在外表面上可能存在疏水小區，它促進蛋白復合物的形成，也可能是疏水配基結合部位或活性部位。這些暴露的疏水區對疏水層析純
疏水作用層析法純化蛋白質實驗
實驗方法原理 在疏水層析的主要支持介質上含有大小不等的疏水側鏈，烷基或芳香基，可是絕大多數情況起作用的是苯基或辛基。當碳氫鏈長度增加，即變得更疏水時，疏水強的少量蛋白質被吸附。這時疏水相互作用太強，需用極端方法洗脫，可能會導致蛋白質變性。苯基瓊脂糖比辛基瓊脂糖疏水性低，是疏水純化中效果不錯的常用介質
mRNA的提取及純化實驗——磁珠法
真核細胞的mRAN是單順反子，其最顯著的特征是具有5‘'端帽子結構和3'端的poly A的結構，此poly A結構為mRNA的提取提供了有效的途徑。實驗材料mRNA試劑、試劑盒mRNA分離試劑盒異丙醇NaAC儀器、耗材儀器水浴離心機取液器分光光度計實驗步驟一、生物素標記的Oligo（
疏水作用層析法純化蛋白質實驗
疏水作用層析法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 在疏水層析的主要支持介質上含有大小不等的疏水側鏈，烷基或芳香基，可是絕大多數情況起作用的是苯基或辛基。當碳氫鏈長度增加，即變得更
實驗室純水設備純化水超濾法
實驗室純水設備水純化一般的常見水純化方法有：離子交換法，活性碳吸附法，微孔過濾法，超濾法和反滲透法，本篇文章小編為您介紹超濾法相關內容介紹:首先為您介紹下微孔薄膜微孔薄膜是依其孔徑大小來去除顆粒，而超濾(UF)薄膜則是一個分子篩，它以尺寸為基準，讓溶液通過極細微的濾膜，以達到分離溶液中不同大小分子的
抗藥性突變株的分離實驗——梯度平板法
實驗方法原理生物的抗藥性突變是 DNA 分子的某一特定位置的結構改變所致，與藥物的存在無關，某種藥物的存在只是作為分離某種抗藥性菌株的一種手段，而不是作為引發突變的誘導物，因而在含有一定抑制生長藥物濃度的平板上涂布大量的細胞群體，極個別抗性突變的細胞會在平板上長成菌落。將這些菌落挑取純化，進一步進行
開發用于分離和純化的聚焦梯度（三）
聚焦梯度可明顯提高圖4所示色譜圖中3號峰和4號峰的分離度。5號峰和6號峰因受到梯度聚焦部分的影響而出現移位，梯度部分繼續在較緩的斜率下洗脫化合物，直至設定用于進行柱清洗的較高百分比的乙腈進入色譜柱。較緩的聚焦梯度能在不增加運行時間的情況下對天然混合組分提供更高的分離度，因而使色譜分析師能夠獲得更純的
開發用于分離和純化的聚焦梯度（二）
系統體積被定義為從梯度形成點到色譜柱前端的體積。系統體積用于聚焦梯度的設計。如圖1所示，本試驗所用儀器配置下的系統體積是3.0 mL。?設計聚焦梯度第1步在2.47分鐘洗脫3號色譜峰的溶劑濃度在較早的時間點上形成。如圖3所示，檢測器和梯度形成點之間的偏移量等于系統體積加上柱體積。用于這臺特定系統的偏
開發用于分離和純化的聚焦梯度（一）
引言用于進行分離和純化的色譜分離方法與分析型分離方法受到相同物理和化學原理的制約。然而，在制備型試驗中，科學家通常在大型柱上和高質量負載下分離化合物，并需要更高的分離度以提高所收集組分的純度和回收率。雖然設計更緩的梯度是提高分離度的一種較好的首選方法，但改變整個分離過程的梯度斜率可導致峰寬加大和總運
蔗糖酯的薄層色譜法
以硅膠G板為固定相、甲苯-乙酸乙酯-甲醇-水(體積比為10∶5∶4.5∶0.2)為流動相,研究建立了蔗糖酯薄層色譜分析方法。在蔗糖酯上行展開后,用脲-磷酸-水飽和正丁醇溶液顯色,斑點呈藍色,蔗糖單酯的Rf值為0.16,多酯的Rf值為0.38～0.93。在70 ℃顯色20 min的最佳條件下,蔗糖單酯
用高速固定角轉頭不連續蔗糖梯度分離細胞器
在例（十）中已介紹了用日立CR22G/21G離心機R18A轉頭，日立50ml錐底組織培養管分離質膜的方法。下面介紹用一般的圓底離心管（瓶），不連續（階梯）蔗糖梯度，在高速離心機上分離質膜、內質網、溶酶體、線粒體、過氧化酶體的方法。設備：●主機Hitachi，CR21GⅡ（或21G）高速冷凍離心機●轉
染料配基層析法純化蛋白質實驗——染料配基法
染料配基層析不是真正意義的親和層析，因為它們并不是與它們結合的蛋白質的天然配基。然而染料柱能很好地結合蛋白質，并能導致滿意地純化蛋白質。事實上，有時這種結合甚至比正常的配基更緊。染料配基柱通常是廉價和穩定的，并且具有較高的蛋白質結合容量。所以染料配基層析能作為蛋白質純化中有價值的步驟之一。來源：《蛋
核酸親和層析法純化蛋白質實驗
步驟一 偶聯寡核苷酸到溴化氰活化的 Sepharose 4B 步驟二 核酸親和層析 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 DNA 偶聯至溴化氰活化的 Sepharcse 4
質粒DNA的大量提取和純化實驗——堿法
在制作酶譜、測定序列、制備探針等實驗中需要高純度、高濃度的質粒DNA,為此需要大量提取質粒DNA。大量提取的質粒DNA一般需進一步純化,常用柱層析法和氯化絕梯度離心法。實驗材料細菌試劑、試劑盒STE酚 氯仿NaClPEG乙醇儀器、耗材離心管離心機抽干機實驗步驟1、取培養至對數生長后期的含pBS質粒的
核酸親和層析法純化蛋白質實驗
實驗方法原理 DNA 偶聯至溴化氰活化的 Sepharcse 4B 是通過它們本身的堿基實現的。從理論上講，該方法也許干擾最佳結合序列的接近路徑，但是這樣一個簡單的方法一直被廣泛地成功應用。偶聯效率的定量檢測可經 A260 值測定評估，或者更精確地從偶聯介質上水解核酸和進行磷酸鹽測定。實
羥磷灰石層析法純化核心組蛋白實驗
實驗方法原理 實驗材料 精核試劑、試劑盒 HAP 緩沖液BioGel HTP 粉（Bio－Rad）Bio－Rad 蛋白定量系統（可選）儀器、耗材 2 cm×15 cm 柱及附件 Centriprep－10 濃縮器（Amicon； 可選）實驗步驟 1. 用 25 ml HAP 重懸約 2 ml 精核（
蛋白質的純化實驗——膠體過濾法
不同大小的蛋白質分子進入膠體過濾管柱，可依其分子量差異分離；是一種廣泛應用的蛋白質partition色析法 。實驗材料Sephacryl S-300膠體試劑、試劑盒緩沖液buffer A-150儀器、耗材色析管柱鐵夾試管鐵架水平儀收集器濃縮用離心機?濃縮用離心管實驗步驟一、儀器設備色析管柱 （Pha
蛋白質的表達、分離、純化實驗——層析法
蛋白質表達、分離、純化可以：（1）探索和研究基因的功能以及基因表達調控的機理；（2）供作結構與功能的研究；（3）作為催化劑、營養劑等。實驗方法原理攜帶有目標蛋白基因的質粒在大腸桿菌BL21中，在 37℃，IPTG誘導下，超量表達攜帶有6個連續組氨酸殘基的重組氯霉素酰基轉移酶蛋白，該蛋白可用一種通過共
羥磷灰石層析法純化核心組蛋白實驗
實驗材料精核試劑、試劑盒HAP 緩沖液BioGel HTP 粉（Bio－Rad）Bio－Rad 蛋白定量系統（可選）儀器、耗材2 cm×15 cm 柱及附件 Centriprep－10 濃縮器（Amicon； 可選）實驗步驟1. 用 25 ml HAP 重懸約 2 ml 精核（約含有 6 mg DN
染料配基層析法純化蛋白質實驗
染料配基法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 選擇純化特異蛋白質的適宜染料一般是通過反復試驗比較后決定。Cibacron Blue F3GA，作為該領域的先驅染料與煙酰胺腺嘌
振蕩搖床法純化培養少突膠質細胞實驗
實驗方法原理利用少突膠質細胞、星形膠質細胞和小膠質細胞生長存存時間上的差異，以及細胞生長方式、細胞對培養層黏附性不同等特性，用37℃恒溫搖床從培養的混合膠質細胞中分離少突膠質前休細胞，然后再利用差速貼壁的原理用塑料培養皿或培養瓶除去純化后污染的星形膠質細胞以獲得高純度的少突膠質細胞，并在體外誘導分化
醋酸鈉乙醇沉淀法核酸純化實驗
實驗方法原理核酸是多聚陰離子的水溶性化合物，可以與許多1價、2價離子結合形成鹽類，后者在有機溶劑中不溶解也不變性．在較低溫度下形成沉淀．實驗材料待純化樣本試劑、試劑盒醋酸鈉緩沖液無水乙醇70%乙醇實驗步驟實驗試劑：1. 3mol／L醋酸鈉緩沖液，pH5.2：稱取醋酸鈉（NaAC·3H20）408.1
微生物分離純化實驗——稀釋涂布平板法
實驗方法原理該方法操作簡便，普通用于微生物的分離與純化。其基本原理包括兩方面：1. 選擇適合于待分離微生物的生長條件，如營養、酸堿度、濕度和氧等要求或加入某種抑制劑造成只利于該微生物生長，而抑制其他微生物生長的環境，從面淘汰一些不需要的微生物。2. 微生物在固體培養基上生長形成的單個菌落可以是由一個
振蕩搖床法純化培養少突膠質細胞實驗
基本方案 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 利用少突膠質細胞、星形膠質細胞和小膠質細胞生長存存時間上的差異，以及細胞生長方式、細胞對培養層黏附性不同等特性，用37℃恒溫搖床從培養
醋酸鈉乙醇沉淀法核酸純化實驗
實驗方法原理 核酸是多聚陰離子的水溶性化合物，可以與許多1價、2價離子結合形成鹽類，后者在有機溶劑中不溶解也不變性．在較低溫度下形成沉淀．實驗材料 待純化樣本試劑、試劑盒 醋酸鈉緩沖液無水乙醇70%乙醇實驗步驟 實驗試劑：1. 3mol／L醋酸鈉緩沖液，pH5.2：稱取醋酸鈉（NaAC·3H20）4
酵母蔗糖酶的制備實驗
研磨法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 蔗糖酶( inver tase ) (β-D-呋喃果糖苷果糖水解酶) ( fructofuranosidefructohydrol