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  • 發布時間:2020-06-15 20:32 原文鏈接: BlotCycler全自動蛋白質印跡雜交系統與手工操作對比

    Western Blot 屬于經驗依賴性的多步驟實驗,結果的優劣受到多個因素的影響,傳統的手工操作容易引入誤差,難以保證重復性。美國Precision Biosystems公司攜手環亞生物科技有限公司(APG BIO)推出的BlotCycler全自動化的蛋白質印跡雜交系統可以很好的解決了這些問題。

    是全自動化的蛋白質印跡雜交系統Western Blot洗液工作站,自動化完成封閉、孵育、清洗和一抗回收的一系列工作,很好地解放您的勞動力。更為重要和有意義的是:ZL的流體清洗可以減少二抗在膜上的附著,降低背景,提高信噪比和相對靈敏度;自動化的操作流程避免了手工操作的誤差,保證了批次內和批次間實驗的重復性;高通量操作和多條件的設定可以輔助您優化Western Blot 實驗的條件,例如合適的抗體濃度。

    自動化操作,可以獲得更好的重復性

    自動化的過程相對于手工操作可以把誤差降至最低,保證了重復性。

    如上圖所示,使用BlotCycler 平行處理5 張膜,檢測Tubulin 和IL-2蛋白,條帶信號使用分子量標準進行均一化處理,

    目的條帶的相對信號值在5 次實驗中的偏差較小。由此可見,BlotCycler 的自動化操作能夠保證較好的重復性。

    ZL的流體技術降低背景,提高信噪比和相對靈敏度。

    通過一系列對比實驗發現,使用BlotCyclerTM 進行Western Blot 可以獲得更低的背景值,目的蛋白質條帶更加清晰銳利。

     


    如上圖所示,泳道1、2、3 分別上樣Hela 細胞的裂解液、重組的人IL-2 蛋白和前兩者的混合物,加入小鼠源Tubulin和兔源IL-2 的一抗,以及DyLight549 標記的抗鼠二抗和DyLight649 標記的抗兔二抗。
    設立4 組平行實驗:BlotCyclerTM 4℃環境操作,手工4℃環境操作,BlotCyclerTM 室溫環境操作,手工室溫環境操作, 膜信號檢測使用相應的熒光成像設備。不同組內蛋白條帶的信號通過分子量標準品進行均一化處理。

    結果發現,使用BlotCyclerTM 操作所獲得的IL-2 和Tubulin 的相對信號值均高于手工操作,不論是4℃還是室溫環境。

    由此可見,BlotCyclerTM 的自動化操作確實能夠降低背景值,提高信噪比和相對靈敏度。

    通過以上對比我們可以看出,BlotCycler全自動化的蛋白質印跡雜交系統可以很好的避免手工所引起的誤差,降低背景,提高信噪比和相對靈敏度,對從事Western Blot實驗的科研工作者來說是個不錯的選擇。


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