試劑、試劑盒 上清固體硫酸銨濃硫酸Tris 堿緩沖液 B
儀器、耗材 聚丙烯燒杯磁力攪拌器與攪拌子聚碳酸酯離心管超速離心機帶刻度的聚丙烯量筒粗棉布聚丙烯漏斗橡皮淀帚 刮勺透析袋
實驗步驟
材料與設備
上清，得自實驗 2(約 700~1000 ml)
固體硫酸銨
聚丙烯燒杯（2x4000-ml)
磁力攪拌器與攪拌子
聚碳酸酯離心管（6x500-ml)
超速離心機，備有 3000-ml 容積的轉頭
帶刻度的聚丙烯量筒（2x4000-ml)
粗棉布
聚丙烯漏斗（大的，寬嘴型）
濃硫酸（稀釋至 50%v/v 水溶液）
橡皮淀帚/刮勺
Tris 堿（1mol/L; 約 10 ml)
聚丙烯漏斗（小的，具長莖的）
透析袋（標稱截留分子量 6000~8000Da; 洗浄)
試劑
緩沖液 B(10x)(臨用前配制 4000 ml 1x 緩沖液 B，并加 2-巰基乙醇至 1 mmol/L)
(配方，見“試劑的配制”，PP.82~83)
操作程序
1) 以實驗 2 所得上清的體積為基礎（減去為測活而取出的等分試樣，于硫酸銨表 (見附錄 4) 上査出配成 0%~60% 飽和度所需的固體硫酸銨量。應為 361 g/L。稱取適量硫酸銨，并將團塊研碎成細粉 。
2) 將上清置 4000-ml 聚丙烯燒杯中，并放人大的磁力攪拌子。置冷室的大磁力攪拌器上慢慢攪拌。于 20 min 內緩慢抖動加人硫酸銨。如固體硫酸銨沉于燒杯底部，可停幾分讓其溶解。然后再繼續攪拌 40 min(即，共 60 min)。
3) 將混合物轉至 500-ml 聚碳酸酯離心管，平衡后，置超速離心機中，4°C,8000r/min 離心 60 min。
4) 移出上清，倒人鋪有兩層粗棉布的聚丙烯漏斗后收集于帶刻度的聚丙烯量筒中。棄去沉淀物。記錄上清液的體積。留 1% 的體積供以后測活用。你將需要這兩個體積作計算。
5) 將上清移至 4000-ml 聚丙烯燒杯。用 pH 計測量，中速攪拌，加 50%(v/v) 硫酸溶液，至 pH 達約 4.05。努力讓 pH 低于 4.1 髙于 4.0。
6) 燒杯置冷室, 攪拌 1h。
7) 將上清移至 500-m l 聚碳酸酯離心管。于超速離心機中，4°C,8000r/min 離心 60 min。
8) 移出上清并棄去。用橡皮淀帚，重懸沉淀物于幾毫升含幾滴 1mol/LTris 堿的蒸餾水中。應以最小的體積重懸沉淀物。
9) 戴上手套，將懸液轉移至透析袋。用具長莖的聚丙烯小漏斗灌人透析袋。排出過量的空氣，留出 50% 空余（透析袋應是癟的，無空氣）。透析袋兩頭至少打雙結扎緊或用夾鉗夾緊。
10)40°C 下，對蒸餾水透析 4 h, 其間換液一次。然后，轉至 4000 ml lx 綏沖液 B 中，繼續透析過夜（4°C)。在所有透析的情況下，均由小攪拌子在燒杯中緩慢攪拌，混勻透析液。不能讓攪拌子碰擊透析袋，否則透析袋會破裂。