1 范圍
本方法規定了辣椒制品中蘇丹紅I的膠體金免疫層析快速檢測方法。
本方法適用辣椒醬、辣椒油、辣椒粉中蘇丹紅I的快速測定。
2 原理
本方法采用競爭抑制免疫層析原理。樣品中的蘇丹紅I與膠體金標記的特異性抗體結合，抑制了抗體和檢測線（T線）上抗原的結合，從而導致檢測線顏色深淺的變化，通過檢測線與控制線（C線）顏色深淺比較，對樣品中蘇丹紅I進行定性判定。
3 試劑和材料
除另有規定外，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T 6682規定的二級水。
3.1 試劑
3.1.1 乙腈。
3.1.2 無水硫酸鎂。
3.1.3 正己烷。
3.1.4 二氯甲烷。
3.1.5 氫氧化鈉。
3.1.6 氫氧化鈉溶液（2mol/L）：稱取氫氧化鈉（3.1.5）8g，用水溶解并稀釋至100mL。
3.1.7 無水乙醇。
3.1.8 復溶液：將無水乙醇（3.1.7）與水按照體積比25:75混勻。
3.2 參考物質
蘇丹紅I參考物質的中文名稱、英文名稱、CAS登錄號、分子式、相對分子量見表1，純度≥95%。
表1 蘇丹紅I參考物質的中文名稱、英文名稱、CAS登錄號、分子式、相對分子量
中文名稱 | 英文名稱 | CAS登錄號 | 分子式 | 相對分子量 |
蘇丹紅I | Sudan I | 842-07-9 | C16H12N2O | 248.28 |
注：或等同可溯源物質。
3.3 標準溶液的配制
3.3.1 蘇丹紅I標準儲備液（1mg/mL）：精密稱取蘇丹紅I參考物質（3.2）適量，置于10mL容量瓶中，加入適量乙腈（3.1.1）超聲溶解后，用乙腈稀釋至刻度，搖勻，制成濃度為1mg/mL的蘇丹紅Ⅰ標準儲備液。-20 ℃避光保存，有效期6個月。
3.3.2 蘇丹紅I標準中間液（1μg/mL）：精密量取蘇丹紅I標準儲備液（1mg/mL）（3.3.1）100μL，置于100mL容量瓶中，用乙腈（3.1.1）稀釋至刻度，搖勻，制成濃度為1μg/mL的蘇丹紅I標準中間液。
3.4 材料
3.4.1 固相萃取柱：CNW Poly-sery MIP-SDR固相萃取柱（200mg/3mL），或相當者。
3.4.2 蘇丹紅I膠體金免疫層析試劑盒，適用基質為辣椒醬、辣椒油、辣椒粉。
3.4.2.1 金標微孔。
3.4.2.2 試紙條或檢測卡。
4 儀器和設備
4.1 移液器：200μL、1mL和5mL。
4.2 渦旋混合器。
4.3 離心機：轉速≥4000r/min。
4.4 電子天平：感量為0.01g。
4.5 氮吹儀。
4.6 水浴鍋。
4.7 環境條件：溫度15℃～35℃，濕度≤80%。
5 分析步驟
5.1 試樣制備
取適量樣品，液體樣品或半固體樣品充分混勻，固體樣品充分粉碎混勻。
5.2 試樣的提取
5.2.1 辣椒醬
稱取辣椒醬2g（精確至0.01g）于15mL離心管中，加入0.5g無水硫酸鎂（3.1.2）和5mL正己烷（3.1.3）提取液，渦旋振蕩1min后，4000r/min離心5min。將上清液全部加入到固相萃取柱（3.4.1）中，流出液棄去。再加入6mL正己烷淋洗固相萃取柱，流出液棄去。用2mL二氯甲烷（3.1.4）洗脫固相萃取柱，收集洗脫液吹干。精密加入400μL復溶液（3.1.8），渦旋混合1min，作為待測液，立即測定。
5.2.2 辣椒油
稱取辣椒油5g（精確至0.01g）于15mL離心管中，加入8mL正己烷（3.1.3）進行提取，渦旋振蕩1min后，將上清液全部加入到固相萃取柱中，流出液棄去。再加入6mL正己烷淋洗固相萃取柱，流出液棄去。用2mL二氯甲烷（3.1.4）洗脫固相萃取柱，收集洗脫液吹干。精密加入400μL復溶液（3.1.8），渦旋混合1min，作為待測液，立即測定。