EcoRI酶及其酶切緩沖液；
HindⅢ酶及其酶切緩沖液；
瓊脂糖(Agarose)。
二、 器材
電泳儀, 臺式高速離心機, 恒溫水浴鍋, 微量移液槍, 微波爐, 瓊脂糖凝膠成像系統。
操作方法
一、 DNA酶切反應
1. 用微量移液槍向滅菌的eppendorf管分別加入DNA 1μg和相應的限制性內切酶反應10×緩沖液2μL, 再加入去離子水使總體積為19μL, 將管內溶液混勻后加入1μL酶液,用手指輕彈管壁使溶液混勻, 也可用微量離心機甩一下, 使溶液集中在管底。
2. 混勻反應體系后, 將eppendorf管置于適當的支持物上（如插在泡沫塑料板上）, 37℃水浴保溫2-3小時, 使酶切反應完全。
3. 每管加入2μL 0.1mol/L EDTA(pH8.0), 混勻, 以停止反應, 置于冰箱中保存備用。
二、DNA分子量標準的制備
采用EcoRⅠ或HindⅢ酶解所得的λDNA片段來作為電泳時的分子量標準。λDNA為長度約50kb的雙鏈DNA分子,
其商品溶液濃度為0.5mg/mL, 酶解反應操作如上述。HindIII切割 DNA后得到8個片段, 長度分別為23.1, 9.4, 6.6,
4.4, 2.3, 2.0, 0.56和0.12kb。EcoRI切割lDNA后得到6個片段, 長度分別為21.2, 7.4, 5.8, 5.6,
4.9和2.5kb。
三、 瓊脂糖凝膠的制備
1. 取10×TBE緩沖液20mL加水至200mL, 配制成1×TBE稀釋緩沖液, 待用。
2. 膠液的制備：稱取0.4g瓊脂糖, 置于200ml錐形瓶中, 加入50mL 0.5×TBE稀釋緩沖液, 放入微波爐里加熱至瓊脂糖全部熔化, 取出搖勻, 此為0.8％瓊脂糖凝膠液。
3. 膠板的制備：將有機玻璃膠槽置于水平支持物上, 插上樣品梳子, 注意觀察梳子齒下緣應與膠槽底面保持1mm左右的間隙。
向冷卻至50-60℃的瓊脂糖膠液中加入溴化乙錠(EB)溶液其終濃度為0.5μg /mL(也可不把EB加入凝膠中,
而是電泳后再用0.5μg/mL的EB溶液浸泡染色)。用移液器吸取少量融化的瓊脂糖凝膠封有機玻璃膠槽兩端內側,
待瓊脂糖溶液凝固后將剩余的瓊脂糖小心地倒入膠槽內, 使膠液形成均勻的膠層。倒膠時的溫度不可太低, 否則凝固不均勻, 速度也不可太快,
否則容易出現氣泡。待膠完全凝固后撥出梳子, 注意不要損傷梳底部的凝膠,然后向槽內加入0.5×TBE稀釋緩沖液至液面恰好沒過膠板上表面。
4. 加樣：取10μL酶解液與2μL 6×加樣緩沖液混勻, 用微量移液槍小心加入樣品槽中。若DNA含量偏低, 則可依上述比例增加上樣量,
但總體積不可超過樣品槽容量。每加完一個樣品要更換槍頭, 以防止互相污染, 注意上樣時要小心操作, 避免損壞凝膠或將樣品槽底部凝膠刺穿。
5. 電泳：加完樣后, 接通電源。控制電壓保持在60-80V, 電流在40mA以上。當溴酚藍條帶動到距凝膠前沿約2cm時, 停止電泳。
6. 染色： 未加EB的膠板在電泳完畢后移入0.5μg/mL的EB溶液中, 室溫下染色20-25分鐘。
7、 觀察和拍照：在波長為254nm的長波長紫外燈下觀察染色后的或已加有EB的電泳膠板。DNA存在處顯示出肉眼可辨的熒光條帶。
注意事項
(1) 酶切時所加的DNA溶液體積不能太大，否則DNA溶液中其他成分會干擾酶反應。
(2) 酶活力通常用酶單位（U）表示，酶單位的定義是：在最適反應條件下，1小時完全降解1μg
λDNA的酶量為一個單位，但是許多實驗制備的DNA不象λDNA那樣易于降解，需適當增加酶的使用量。反應液中加入過量的酶是不合適的，除考慮成本外，酶液中的微量雜質可能干擾隨后的反應。
(3) 市場銷售的酶一般濃度很大，為節約起見，使用時可事先用酶反應緩沖液（1×）進行稀釋。另外，酶通常保存在50%的甘油中，實驗中，應將反應液中甘油濃度控制在1/10之下，否則，酶活性將受影響。
(4) 觀察DNA離不開紫外透射儀, 可是紫外光對DNA分子有切割作用。 從膠上回收DNA時, 應盡量縮短光照時間并采用長波長紫外燈(300-360nm), 以減少紫外光切割DNA。
(5) EB是強誘變劑并有中等毒性,配制和使用時都應戴手套,并且不要把EB灑到桌面或地面上。凡是沾污了EB的容器或物品必須經專門處理后才能清洗或丟棄。
(6) 當EB太多, 膠染色過深, DNA帶看不清時, 可將膠放入蒸餾水沖泡, 30分鐘后再觀察