一、簡介
熒光酶免疫分析篩選方法是在 EIA 基礎上加入熒光標記的酶底物,用熒光計檢測熒光度值來判斷結果。AOAC989.15方法食品中沙門氏菌單克隆酶免疫熒光和比色篩選法(Q-Trol)》即為此方法。
AOAC 公定方法 989.15是用于對存在于所有食品中沙門氏菌的推定方法,因為試驗中使用的單克隆抗體可與少數非沙門氏菌產生交叉反應,故不是一個確證試驗。
用酶免疫分析(EIA)法測到的陽性樣品增菌肉湯和M肉湯必須按常規標準方法劃選擇性平板對典型或可疑菌落進行鑒定。
二、原理
此方法是基于 EIA 測定食品中沙門氏菌抗原。沙門氏菌抗原的單克隆抗體附著在塑料微量板小孔的內表面上。將待檢樣品加到微量板的孔中,如果樣品有沙門氏菌抗原存在,它們就與吸附在孔穴表面的抗體結合,樣品中的其他物質則被沖洗掉。
加入與堿性磷酸酶接合的沙門氏菌抗體。如果其與附著于孔表面吸附的抗體上的沙門氏菌抗原結合,這就形成了抗體抗原抗體復合物。洗去沒有結合的接合劑,加入熒光( FS 檢測)或黃色底物,用熒光計( FS 檢測)或3種比色法之一:①光度計自動檢視終點(ME)檢測,以可見光終點分析檢視結果;②以目測將不透明孔的顏色與比色卡相比較[橘紅色至暗紅色部分被認作陽性(Ⅵ 檢測)];③在 VI 分析后,將 VI 檢測孔中的部分溶液移人清潔的微量板的孔中,用光度計檢視終點顏色(VR 檢測)。樣品的臨界值(out off value)大于或等于所建議的臨界值即被認作沙門氏菌抗原陽性。