• <li id="yyyyw"><noscript id="yyyyw"></noscript></li>
  • <table id="yyyyw"><noscript id="yyyyw"></noscript></table>
  • <td id="yyyyw"><option id="yyyyw"></option></td>
  • 發布時間:2021-11-10 11:59 原文鏈接: 自動化傳導法檢測沙門氏菌的操作規范

    根據電阻抗測量的原理,關鍵是選用適宜的培養基,以保證任何電導(或電阻抗)的變化都是由目標微生物的生長所致,通過儀器檢測電導(或電阻抗)的改變來確定是否存在被檢微生物。馬薩斯公司(Malthus Instrument Ltd)的 Mal-thus 系統是經 AOAC 認可批準的惟一用于檢測(初篩)沙門氏菌的電導儀。其關鍵技術是在亞硒酸鹽胱氨酸肉湯(沙門氏菌選擇性肉湯)中使用了含如二水氧化三甲胺(TMAO)或鹽酸三甲胺這樣一類中性不帶電荷的分子,當被細菌還原成三胺后,電導性質可明顯改變。根據選用的專一性培養基不同,電導(或電阻抗法)還可用于大腸桿菌、李斯特氏菌、彎曲桿菌等的初篩檢驗。AOAC 991.38《食品中的沙門氏菌自動化傳導方法》介紹如下。

    AOAC 公定方法991.38為所有食品中推定存在沙門氏菌的檢測方法。陽性試樣必須用標準培養法加以確證。

    1、原理

    試樣在緩沖蛋白胨水-賴氨酸-葡萄糖肉湯中進行預增菌,然后在含有三甲胺-N-氧化物(trimethylamine-N-oxide)和衛矛醇的培養基(沙門氏菌培養基1)及賴氨酸亞硒酸鹽基礎培養基(沙門氏菌培養基2)中進行2管傳導檢測。與那些非沙門氏菌相比,在這兩種培養基中典型的沙門氏菌產生大量的電導變化。在48h 內可得出推定陽性結果。

    2、儀器

    (1)微生物學分析儀

    于35℃進行分析儀器操作。根據在10kHz 的頻率時記錄下的傳導變化來測量微生物的生長,在35℃將兩個電極插入生長培養基檢出變化,能測定出<100微西門子(μS)的傳導變化。符合這些規格的儀器可從Malthus Instruments Ltd.,The Manor Royal Crawley,West Sussex RH10 2PY,U.K.處購得。Malthus 系統由具有IBM兼容專用計算機(PC)的1或2個分析器組成,并具有240試驗電容量,能自動進行數據收集。

    (2)自動移液器

    能吸移100μL。

    3、培養基和試劑

    (1)和(2)項可從Malthus Instruments Ltd.購得。也可使用等效的培養基。

    (1)前增菌肉湯  10.0g 細菌用蛋白胨、5.0g 氯化鈉、3.5gNa2HPO4·2H2O、1.5gKH2PO4·H2O、5gL-賴氨酸、5g D-葡萄糖。混懸各成分于1L H2O中,分裝于帶螺旋蓋的容器內,每容器225mL,于115℃高壓滅菌20min 最終pH值應為7.0±0.2。

    (2)選擇性傳導培養基(當心:培養基中含有亞硒酸氫鈉,避免與皮膚接觸。)①沙門氏菌培養基(Easter and Gbson)  混懸5.0g 細菌學用蛋白胨、10.0g 磷酸氫二鈉、5.0g 衛矛醇、5.6g 三甲胺·HCl、4.0g 亞硒酸氫鈉于1L H2O中,加1mL L-胱氨酸溶液(經溶解0.1g L-胱氨酸于15mL 1mol/L NaOH中并用無菌水稀釋至100mL 而制成的)。最終pH值應為7.0±0.2。

    ②沙門氏菌培養基2混懸5.0g 乳朊水解物、10.0g D-葡萄糖、10.0g L-賴氨酸、4.0g亞硒酸氫鈉于1L H2O中。按(2)①,加10mL L-胱氨酸溶液。最終pH值為6.5±0.2。

    用一細菌濾器對傳導培養基(2)進行過濾除菌。以無菌操作,分裝過濾后的培養基于滅菌生長室內或與自動傳導分析器相適用的槽中。

    (3)1mol/L 氫氧化鈉溶液。

    (4)1mol/L 鹽酸溶液。

    4、通則

    在槽內的選擇性導電性培養基必須貯存于4~6℃。從培養基制作的當日起于4~6℃可穩定3個月。接種前,使培養基恢復至室溫。

    包括陽性[鼠傷寒沙門氏菌,NCIMB 13034(National Collections of Industrial and Ma-rine Bacteria,Torry Research Station,PO Box 31,135 Abbey Rd. Aberdeen AB98DG,Scottland)]和陰性對照(大腸埃希氏菌ATCC 25922)以保證培養箱和分析器的正確功能。

    5.樣品制備

    (1)前增菌

    以無菌操作稱取25g 樣品放入裝有225mL 前增菌肉湯的適宜容器中。根據不同的產品,混合和均質的方法亦異。若產品是液體的、粉末狀的、碎的或粉碎的,可省去均質的步驟。將未經粉碎的和完整的產品均質2min。蓋上容器,于室溫下靜置60min。混勻,用試紙測定pH值。如必要,用滅菌的1mol/L NaOH 或 HCl 調節pH 值至7.2±0.2。在測定最終pH值前,應將培養基混勻。以無菌操作,將樣品移入一滅菌的帶螺旋蓋的500mL 容器內。旋松容器蓋1/4圈于35℃培養16~24h。

    (2)選擇性增菌

    移取0.1mL 經培養的前增菌培養液于裝有沙門氏菌培養基1和2的一次性培養小瓶中。于35℃培養至達到可疑陽性結果的判定標準,最長培養至30h。

    (3)再次培養

    必須立即從得出可疑陽性結果的任何瓶中挑取1接種環肉湯按常規培養方法劃線于 Hektoen 腸道瓊脂(HE)、木糖賴氨酸去氧膽酸鹽瓊脂(XLD)和亞硫酸鉍瓊脂(BS)上,進行再次培養。

    6、分析儀的安裝

    (1)用提供的電纜,通過 RS232端口連接分析器到一 IBM AT PC 兼容機上。

    (2)將分析器和 PC 連接于總電源上。

    (3)把冷凝管連接于冷凝器和分析器后面的插口中。

    (4)把冷凝器連接電纜插到冷凝器和培養箱后面的 DIN 插座上。若僅使用一個分析器,必須用標有“Incubator 1”的插頭。

    (5)分析器水位的檢測,打開并給水箱注入蒸餾水或無離子水,繼續注入至指示器上顯示出“STOP FILLING”字樣。注水后,蓋上分析器水箱的上口。

    (6)把冷凝器連接于總電源上,但不接通電源。將3L 33%(V/V)乙二醇基礎防凍液從冷凝器上部的小口注入冷凝器。冷凝劑最高注入至分析器指示上顯示“STOP ADDING COOLANT”字樣。

    (7)確保 MS-DOS 被安裝在 PC 上。打開 PC,當顯示C>提示時,將軟盤1(Malthus)放入A驅動器中。鍵入A:install,于是在熒光屏上出現提示。

    (8)安裝完畢。若在安裝時選用了自動安裝,則按 C/MALTHUS<ENTER>然后再按 MALTHUS,或reboot PC,輸入程序。

    (9)必須設定配置系統,方可使用分析器。從主菜單選擇“SYSTEM”并按<ENTER>鍵,從程序初始菜單上,按照熒光屏提示選擇“change config”(F6)。按 F10返回初始菜單。

    (10)由“change temperature”選擇鍵(F5),將分析器的溫度設定為10℃。返回初始菜單并選擇“start new test"(F1)。

    (11)啟動油泵,必須將冷凝器抽氣減壓,并從系統中驅除空氣。設定溫度后,等待10min。驗查冷凝器管是否連接在冷凝器底部的接口(標有 OUT)。從分析器上的接口處取下該管,并將其末端放入低于冷凝器的適當容器內,使冷凝劑從管中排出直到無氣泡出現。重新將該管接好。

    (12)從主菜單上選擇“UTILITIES”設定分析器的溫度35℃。然后選擇 “changetemp”(F7),在顯示器控制板上可顯示出分析儀器中水的溫度。待溫度穩定后再開始試驗。

    7、分析儀的操作

    (1)確保系統的所有部件均已接好,并按照制造商的使用者指南進行操作。

    (2)檢查系統軟件是否裝入。分析器的顯示器是否顯示正確的培養溫度(35℃)。若不正確,用“UTILITIES”選擇設定正確的溫度。

    (3)往培養瓶中接種,并將瓶蓋蓋嚴擰緊。

    (4)將培養瓶電極連接于瓶連接器的蓋上,按壓使其連接,避免用力過大。

    (5)將培養瓶放入分析器中的一個洞內,并將連接器定位于印制電路板(PCB)相鄰的洞中,向下壓穩使其不轉動。

    (6)注意培養瓶在培養箱中的位置并作記錄,用于進一步查證。

    (7)樣品一經放入分析器后,數據被自動地收集和處理。可疑沙門氏菌陽性的結果為光亮最強的試樣,并應按9中所述進行確證。

    8、解釋

    對于沙門氏菌培養基1推定陽性結果的判定標準是一個總傳導變化≥200μS(微西門子)和最大變化率≥25μS/h,而對于沙門氏菌培養基2,總傳導變化≥100μS,最大變化率≥25μS/h。

    總傳導變化和變化率由檢測時間來測量。檢出時間是由連續傳導檢視結果與一個試驗瓶超出預定的臨界值(0.8μS)之間的時間差來確定。

    9、可疑傳導陽性結果的確證

    可疑傳導法陽性表明可能存有沙門氏菌。所有推定陽性結果必須按 AOAC 967.25~967.28(沙門氏菌的鑒定方法)進行確證。


  • <li id="yyyyw"><noscript id="yyyyw"></noscript></li>
  • <table id="yyyyw"><noscript id="yyyyw"></noscript></table>
  • <td id="yyyyw"><option id="yyyyw"></option></td>
  • caoporn免费视频国产