一、儀器和試劑：
1、儀器：電泳儀（滿足穩壓500V）、離心機、垂直板電泳槽、鉗子、5ml、10ml移液管、微量進樣器、聚丙烯離心管。
2、試劑：尿素，乙醇，甘氨酸，甲基綠，三氯乙酸，冰乙酸，過氧化氫，硫酸亞鐵，抗壞血酸，α-氯乙醇。
3、藥劑配制：
（1）蛋白質提取液：
小麥：0.05克甲基綠溶于25毫升α-氯乙醇中，加蒸溜水至100毫升。低溫保存。
大麥：0.05克甲基綠溶于20毫升α-氯乙醇中，加入118克尿素，再加入1毫升β-巰基乙醇，加蒸溜水至100毫升。低溫保存。
（2）電泳緩沖液：0.4克甘氨酸加蒸溜水溶解，加4毫升冰乙酸，定容至1000毫升。低溫保存。
（3）凝膠緩沖液：1.0克甘氨酸加蒸溜水溶解，加20毫升冰乙酸，定容至1000毫升。低溫保存。
（4）0.6%過氧化氫：30%過氧化氫2毫升，加蒸溜水至100毫升。低溫保存。
（5）染色液：0.25克考馬斯亮藍加25毫升無水乙醇溶解，加入50克三氯乙酸，加水至500毫升。
（6）凝膠液：丙烯酰胺20克，甲叉雙丙烯酰胺0.8克，尿素12克，硫酸亞鐵0.01克，抗壞血酸0.2克，用凝膠緩沖液溶解并定容至200毫升。低溫保存。
二、實驗步驟：
1、樣品提取：
一般每個樣品測定100粒種子，若更準確地估測品種純度，則需更多的種子。如果分析結果要與某一純度的標準值比較，可采用順次測定法（sepuential testing）來確定，即50粒作為一組，必要時刻連續測定數組，以減少工作量。如果只鑒定真實性，可用50粒。
取小麥或大麥種子，用鉗子逐粒夾碎（夾種子時最好墊上小片清潔的紙，以便于清理鉗頭和防止樣品之間的污染），置1.5毫升離心管中，加入蛋白質提取液（小麥0.2毫升，大麥0.3毫升）充分搖動混合，在室溫下提取24小時，然后在18000×g條件下離心15分鐘。取其上清液用于電泳。
2、凝膠制備：
從冰箱中取出凝膠溶液和過氧化氫液，吸取10毫升凝膠溶液，加1滴0.6%過氧化氫，搖勻后迅速倒入封口處，稍加搖動，使整條縫口充滿膠液，讓其在5-10分鐘聚合封好。
吸取45毫升凝膠溶液，加3滴0.6%過氧化氫，迅速搖勻，倒入凝膠板之間，馬上插好樣品梳，讓其在5-10分鐘內聚合。
3、進樣：
小心抽出樣品梳，將玻璃板加在電泳槽上，用濾紙或注射器吸取樣品槽中多余的水分，然后用微量進樣器吸取10-20μl樣品加入樣品槽中。
4、電泳：
在前后槽注入電極液，前槽接正極，后槽接負極。然后打開電源，逐漸將電壓增到500V電泳時，要求在15-20℃溫度下進行。電泳時間一般為60-80分鐘，具體時間可按甲基綠遷移時間來推算，電泳時間為甲基綠移至前沿所需時間的2-2.5倍。
5、染色：
將膠板小心的取下，在染色液中染色1-2天。一般情況不需要脫色，但為使譜帶清晰，可用清水沖洗。
三、鑒定：
譜帶命名可采用相對遷移率法，或電泳程式法。根據醇溶蛋白譜帶的組成和帶型的一致性，并與標準樣品電泳圖譜比較，堅定種子真實性以及測定品種純度。 展開 | 