細菌淀粉酶和過氧化氫酶定性實驗及其生化特征觀察

一、實驗目的 通過對淀粉酶和過氧化氫酶的定性測定，加深對酶和酶促反應的感性認識

二、實驗原理 酶是微生物機體內生物合成的一種生物催化劑，它是高分子蛋白質，具有催化生物化學反應加速進行，并具有傳遞電子、原子和化學基團的作用。微生物的酶按它所在細胞的部位分為胞外酶、胞內酶及表面酶。本實驗對胞外酶中的兩種即淀粉酶和過氧化氫酶(亦叫接觸酶)進行定性測定。細菌  淀粉酶能將遇碘呈藍色的淀粉水解為遇碘不顯色的糊精，并進一步轉化為糖，淀粉被酶催化分解后用碘檢測不到其變色現象；過氧化氫酶能將過氧化氫快速分解為水和氧氣，能用肉眼很容易的觀測到產生的氣泡。

三、儀器和材料 1、試管(1 5 mm-1 50 mm)4支、試管架1個、培養皿(90mm)3套、接種環。2、肉膏胨、淀粉瓊脂  培養基1瓶(約50 ml)3、0.2％淀粉溶液1滴瓶、革氏碘液1滴瓶、10％--3％過氧化氫1滴瓶。4、生活污水活性污泥混合液或枯草桿菌培養液一瓶。枯草桿菌和大腸桿菌斜面各一支。

四、實驗內容和操作方法 (一)生活污水活性污泥混合液中淀粉酶的測定1．取4支干凈的試管，按1、2、3對照編號。放在試管架上備用。2．在1號、2號、3號試管內分別加入 5ml、10ml、15ml的活性污泥混合液，再在1號和2號試管中分別加10 ml和5 ml蒸餾水。在對照管內加15 ml蒸餾水。3．在1號、2號、3號及對照管中分別加入O．2％的淀粉液若干滴(淀粉液的用量，在做預備實驗時根據樣品中淀粉酶含量多少而定)，迅速搖勻并記下反應的初始時間。4．在上述4個管內分別加若干滴碘液(碘液用量在預備實驗時酌定)，迅速搖勻，這時各管均呈藍色。5．觀察結果。注意各管的變化，記下各管藍色完全消失時的時間(即淀粉酶和淀粉反應完全的時間)，并對結果進行分析。(二)細菌淀粉酶在固體培養基中的擴散實驗1．將肉膏胨淀粉瓊脂培養基加熱融化，待冷至45℃左右倒人無菌培養皿內(每皿約10 ml)，共倒3個，靜置待冷凝即成平板。2．在無菌操作條件下，用接種環分別挑取枯草桿菌、大腸桿菌  和活性污泥各一環分別在3個平板上點種5個點。倒置于37℃恒溫箱內培養24～48 h。3．觀察結果，取出平板，分別在3個平板內菌落周圍滴加碘液，觀察菌落周圍顏色的變化。若在菌落周圍有一個無色的透明圈，說明該細菌產生淀粉酶并擴散到基質中去。若菌落周圍仍為藍色，說明該細菌不產生淀粉酶。(三)過氧化氫酶的定性測定1．將配備的枯草桿菌和大腸桿菌斜面各1支放在試管架上。2．用滴管吸取過氧化氫滴加入兩管菌種斜面上，有氣泡產生的為接觸酶陽性(有過氧化氫酶)；無氣泡產生的為接觸酶陰性(無過氧化氫酶)。

五、實驗結果 把所觀察到的現象記錄下來，進行分析。

六、思考題 1．淀粉酶定性測定中對照應呈什么顏色?為什么?各菌落呈什么顏色?為什么? 2．各菌落滴加過氧化氫后呈什么現象?說明什么問題?