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  • 實驗方法原理由于不同的蛋白質分子所帶的堿性和酸性基團的數目不同,在pH值不同的溶液中,蛋白質分子所帶的凈電荷多少不同。如在生理條件下,整個蛋白質所帶負電荷多,則為酸性蛋白質;帶正電荷多,則為堿性蛋白質。據此,可將標本經三氯醋酸處理提出核酸后,用不同pH值的固綠染液分別染色,細胞內的酸性蛋白和堿性蛋白質顯示出來。
    實驗材料

    小白鼠

    試劑、試劑盒

    PBS緩沖液丙酮二甲苯乙醇三氯醋酸固綠硫酸銅聯苯胺混合液番紅過碘酸酒精液Schiff氏酒精液亞硫酸水蘇木精Carnoy固定液

    儀器、耗材

    光學顯微鏡解剖器材蠟盤載玻片吸水紙染色缸蓋玻片水浴箱

    實驗步驟

    一、方法


    1.  以破壞脊髓法處死蟾蜍,將其腹面向上放人蠟盤中,剪開胸腔,打開心包。小心將心臟剪一小口,取心臟血一滴滴在干凈載玻片一端,推片,按此法制備二張血涂片,室溫晾干。


    2.  將涂片作好標記放在70%乙醇中固定5分鐘,室溫晾干。


    3.  放入5%三氯醋酸中60℃30分鐘,抽提出核酸。


    4.  清水沖洗多次(3分鐘以上),以沖去痕跡的三氯醋酸。


    5.  濾紙吸干玻片上水分。


    6.  一張片放入0.1%堿性固綠(pH8.0~8.5)中染色10~15分鐘,另一張片放入0.1%酸性固綠(pH2.0~2.5)染色5~10分鐘。


    7.  清水沖洗,蓋上蓋片鏡檢。


    二、結果


    經堿性固綠染色片中,胞質、核仁不著色,細胞核大部分被染成綠色,是為堿性蛋白質存在處。經酸性固綠染色片中,因胞質和核仁中有酸性蛋白,被染成綠色。

    展開


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