細胞系的DNASTR譜_細胞團抽提

Qiagen?DNA迷你試劑盒

無水乙醇磷酸緩沖液

小離心管離心機水浴或可以維持56℃的烤箱渦流混合器

一、開始實驗前，必須準備以下試劑：

(a)蛋白酶溶劑溶解：向 Qiagen^? 冷凍干燥的蛋白酶中加適量蛋白酶溶劑。該溶液 2~8°C 保存 2 個月內穩定。

(b)AW 1 和 AW 2 緩沖液：向裝有 AW 1 和 AW 2 濃縮液的瓶子中加人適量無水乙醇。AW 1 和 AW 2 緩沖液室溫下一年內穩定。

(c)AL 緩沖液：用前顛倒充分混勻。

二、操作步驟

（試劑盒生產商的操作步驟，稍加修改）

如果細胞不是以培養基懸浮的細胞懸液，從步驟 5 進行。

如果收到的是在培養基中的細胞團：

1. 樣品 20000 g 離心（離心機，如Eppendorf 5415D 或相似規格） 3 min 。

2. 用細尖移液管，小心移棄上清液。

3 . 以 200 μl PBSA 懸浮細胞。

4. 重復步驟 1、2 一次。

5. 以 200 μl PBSA 懸浮細胞。

6. 將 20 μl Qiagen^? 蛋白酶加到標記好的 1.5 ml 空離心管（如 Eppendorf Biopure Safelock tubes）中。

7. 取 200 μl 各樣品，加到相應標記的已加蛋白酶的離心管中。

8. 每管中加 200 μl AL 緩沖液（裂解緩沖液）。

9. 樣品在 56°C 孵育 30 min 。

10. 每管用渦流混旋器混勻約 15 s。

11. 之后，1000 g 離心 3 s，使管中內容物聚到管底。 .

12. 小心打開每管，加人 200 μl 無水乙醇。

13. 每管用渦流混旋器混勻約 15 s。1000 g 離心 3 s，使管中內容物沉淀。

14. 小心將每管的內容物轉移到對應標記的 QIAamp^? 旋轉柱中，該離心柱已置于收集管中。

15. 抒緊離心柱的蓋子，6000 g 轉 1 min 。

16. 將旋轉柱置于干凈的收集管中，棄掉含濾液的管子。

17. 小心打開旋轉柱的蓋子，加入 500 μl AW1 緩沖液。

18. 重復步驟 15 和 16。

19. 小心打開旋轉柱的蓋子，加入 500 μl AW2 緩沖液。

20. 擰緊蓋子，20000 g 離心 3 min。

21. AW 2 對下游使用有破壞作用，所以建議更換收集管，旋轉柱在以 20000 g 轉離心 1 min 。確保所有的 AW 2 緩沖液已棄掉。

22. 將柱子放入對應標記的 1.5 ml 離心管中。

23. 打開柱子的蓋，加 200 μl AE 緩沖液（洗脫緩沖液）。

24. 56°C 孵育 1 min，然后 6000 g 再離心 1 min 。

25. 每個樣品的 DNA 進行定量，如用 Picogreen （Molecular Probes）。

26. 如果不是馬上進行擴增，樣品應凍存。