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  • 發布時間:2021-05-14 16:33 原文鏈接: 精液分析標準化刻不容緩

     精液分析,特別是精子計數,仍是評估男性生育能力的最基本測試。盡管《WHO人類精液及精子-宮頸粘液相互作用實驗室檢驗手冊》推薦使用牛鮑氏(Neubauer)血細胞計數板作為精液分析的工具,并且建議了質量控制(QC)方法[1],但是,據Keel等[2]報告,對超過530家男科學實驗室就精子密度、形態學、存活率及抗精子抗體的室間質量控制調查結果顯示,同1份精液樣本的精子密度差異范圍達3~492×106/ml,手工檢測的變異系數(CV)為30%~138%,計算機輔助的精液分析(CASA)的CV為24%~99%。不同實驗室所測同1份樣本精子密度的太大差異提示,精子計數方法的不同、計數板種類的不同以及操作的標準化與否對精子計數結果有著直接的影響。進一步的調查和研究清楚地說明了男科學實驗室精液分析的標準化刻不容緩,更詳細的評論參見本期專家談作者Brooks A.Keel教授的文章“精液分析標準化的重要性與緊迫性”。

      最近陸金春等[3]進行的一項對照研究將含已知濃度的美國男科學實驗室QC(US andrology labQC)乳膠珠溶液(Hamilton Thorne Biosciences,USA)作為QC標準溶液引入實驗室QC,來評價不同計數板的準確性和可靠性,這可避免精液樣本固有誤差的來源,如由精液粘度、精子凝集或存在生精細胞等引起的精子密度差異。結果顯示,不同精子計數板的精子計數結果相差較大,引起誤差的原因是多方面的,除精液本身性質所致的固有誤差外,還包括技術誤差,這通常是由于人為或操作引起的,包括樣本的混勻、加樣等操作,但也可歸因于計數板本身的不準確性。不同精子計數板的相對準確性和精密度可產生顯著不一致的結果[3]。

      牛鮑氏血細胞計數板是WHO推薦使用的精子計數工具[1]。血細胞計數板本來是設計用于計數外周血紅細胞與白細胞的,不過已經發現其用于精子計數時結果差異較大[4],這可能與其樣本計數前需要40倍稀釋有關,其亦受環境條件、加樣及分析時間的影響。

      1978年,以色列科學家Makler研制了一種專用于未稀釋精液精子計數的計數板。有數據顯示,其與血細胞計數板的結果之間缺少相關性[5]。據我們所知,Grinsburg等[6]是首先使用一種含有特定顆粒濃度的溶液比較不同計數板結果的人,他們發現Makler計數板的計數及標準差都遠遠高于血細胞計數板和Micro-Cell計數板的結果,我們的研究結果支持這一結論。而Micro-Cell計數板是由Ginsbury和Armand于1990年發明的一次性使用的精子計數板,用于精液自動分析儀中的精子計數,不過在進行手工分析時需要附加顯微鏡網格目鏡才能計數。

      不同實驗室之間精子計數結果的顯著差異可導致臨床精液分析結果的不確定性,1份精液標本的計數結果在此實驗室檢測被認為是正常值范圍,而在彼實驗室可能被認為在不育范圍,這將導致臨床醫生對患者采取不同的治療措施。流行病學研究亦提示,精子密度在過去50年間已有顯著降低,但也有否定這一說法的報道[7]。不同地區精子密度亦有顯著性差異[8,9],但這些報道是不同的人群和不同精子計數方法,而不同精子計數方法獲得的結果差異又十分顯著,提示不同實驗室之間嚴格的QC十分必需。室內QC和室間QC是保證不同實驗室結果準確和可靠的重要措施之一。精子計數是男科實驗室目前考慮較多的質控項目之一[10,11],目前最大的挑戰來自精子計數方法學的標準化和監測[12]。我們的研究顯示,Cell-VU計數板的準確性和精密度均優于血球計數板和Makler計數板,我們驚奇地發現這個結果仍與多年前文獻報道相符[13,14],表明了Cell-VUZL技術獨特的高技術含量和極高的穩定性。而且,Cell-VU可一次性或反復多次使用,這在計數傳染性較強的樣本時將顯示出獨特的優勢。

      Cell-VU計數板用于未稀釋標本的精子計數。它由一個特別設計的標準(3×1″)載玻片與表面被激光蝕刻有計數網格的蓋玻片組成。載玻片和蓋玻片都被清楚地標記以保證正確使用。蓋玻片的1mm×1mm網格被均分為100個0.1mm×0.1mm小方格,而且薄得足以在高倍鏡下無須特別的接合器或網格。載玻片由兩個計數板(允許進行2個樣本的測試)組成,每個計數板的深度均為20μm。這個優化的深度形成的單層精子細胞,使精子的運動不受阻礙,存活率能被評估,并且易于進行精子計數。

      因此,我們建議必須建立一個標準的計數板操作系統可應用于所有實驗室,為不同實驗室的QC評價提供基礎,最終提高所有實驗室結果的準確性、可靠性以及可比較性。

      獲取各種精子計數板的更多資料,請訪問制造商的網站:

      1. 血細胞計數板:WWW.QJSH.com

      2. Marker:www.sefimedical.com

      3. Cell-VU:www.cellvu.com

      4. Micro-Cell:www.concep tiontechnologies.com

     

    參考文獻

    1. 谷翊群,陳振文,于各鳴,等譯,世界衛生組織編. WHO人類精液及精子2宮頸粘液相互作用實驗室檢驗手冊[M]. 第4版. 北京:人民衛生出版社,2001.

    2. Keel BA,Quinn P,Schmidt CF J r,et al. Results of the American Association of Bioanalysts National Proficiency Testing Programme in andrology [J]. Hum Rep rod, 000,15(3):680-686.

    3. 陸金春,呂年青,黃宇烽,等.三種精子計數池的質量評估[J]. 中華男科學雜志,2004,10(10):755-757,760.

    4. Brazil C,Swan SH,Tollner CR,et al. Quality control of laboratory methods for semen evaluation in a multicenter research study [J].J Androl,2004,25(4):645-656.

    5. PetersAJ,Zaneveld LJ,Jeyendran RS. Quality assurance for sperm concentration using latex beads[J]. Fertil Steril,1993,60(4):702-705.

    6. Ginsburg KA,ArmantDR. The influence of chamber characteristics on the reliability of sperm concentration and movementmeasurements obtained by manual and videomicrographic analysis [J]. Fertil Steril,1990,53(5):882-887.

    7. Fisch H,Goluboff ET,Olson JH,et al. Semen analyses in 1283 men from the United States over a 25-year period: no decline in quality [J]. Fertil Steril,1996,65(5):1009-1014.

    8. Fisch H,Ikeguchi EF,Goluboff ET. Worldwide variations in sperm counts [J]. Urology,1996,48(6):909-911.

    9. Fisch H,Goluboff ET. Geographic variations in sperm counts:a potential cause of bias in studies of semen quality [J]. Fertil Steril,1996,65(5):1044-1046.

    10. Franken DR. African experience with sperm morphology training courses[J]. Rep rod Biomed Online,2003,7(1):114-119.

    11. Cooper TG,Bjorndahl L,Vreeburg J,et al. Semen analysis and external quality control schemes for semen analysis need global standardization [J]. Int J Androl,2002,25(5):306-311.

    12. Auger J,Eustache F,DucotB, et al. Intra-and inter-individual variability in human sperm concentration,motility and vitality as-sessment during a workshop involving ten laboratories [J]. Hum Rep rod,2000,15(11):2360-2368.

    13. Seaman EK,Goluboff E,BarChama N,et al. Accuracy of semen counting chambers as determined by the use of latex beads[J]. Fertil Steril,1996,66(4):662-665.

    14. Mahmoud AM,DepoorterB,PiensN,et al. The performance of 10 different methods for the estimation of sperm concentration [J]. Fertil Steril,1997,68(2):340-345.


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