下面兩種情況,常規的穩定株構建式比較困難的,但是辦法總比困難多!
1)過表達:看基因功能。如果是抑制腫瘤細胞的增殖或促進腫瘤細胞的凋亡,那么是很難構建穩定株的(目的基因感染細胞后就會凋亡或不長)。
2)干擾:建議構建可誘導表達的穩定株。RNA 干擾敲減的是細胞內源在用的基因,敲減后,短時間內會看到抑制效果,但時間長了后,細胞內會有調控機制將被抑制的基因上調表達,甚至超過常規的量。
這兩種情況下,建議病毒感染細胞后直接做功能實驗或進行裸鼠成瘤實驗。如果要做穩定株需要用TET-on慢病毒系統。