一、儀器藥品
1．提取液：0.1 M 磷酸緩沖液pH7.0 含0.4M 蔗糖，
0.005M EDTA 
2．反應液：
（1）0.1M磷酸緩沖液pH7.0
（2）1.5M蔗糖溶液（25.67g蔗糖用蒸餾水定容為50 ml ）。
（3）ADP（腺二磷）50mg/ ml （50mgADP溶于1 ml 水中）。
（4）CytC（細胞色素C）1mg/ ml （1mgCytC溶于1 ml 水中）。
（5）NAD（氧化輔酶Ⅰ）3.3mg/ ml （3.3mgNAD溶于0.5 ml 水，用NaOH調至pH7.0，再定容為1 ml ）。
（6）CoA（輔酶A）（每支50單位，250單位相當于1mg）。
（7）TPP（焦磷酸硫胺素）50mg/ ml （3.3mgNAD溶于0.5 ml 水，用NaOH調至pH7.0，再定容為1 ml ）。
（8）0.2MMgCl2(2.03gMgCl2·6H2O定容于為50 ml )。
（9）1.1M葡萄糖（10.9葡萄糖加水定容為50 ml ）。
（10）0.1M琥珀酸（0.118g琥珀酸溶于5 ml 水，用NaOH調至pH7.0，再定容為10 ml ）。
3．0.1M丙二酸（pH7.0）
0.017g丙二酸溶于1 ml 水中，用NaOH調至pH7.0，再定容為2 ml 。
4．0.025 N HCl
二、實驗步驟
1．線粒體懸浮液的制備
（1）25℃下暗處萌發3－4天的綠豆芽，摘取子葉，去掉下胚軸、根和芽。
（2）取30g子葉、40 ml 提取液和少量石英砂，在研缽中（研缽置于冰鹽浴中）快速研磨成勻漿，雙層紗布過濾。
（3）濾液于0℃下，3000rpm離心10分鐘，棄去沉淀。
（4）上清液于0℃下，12000rpm離心20分鐘，棄去上清液。沉淀懸浮于18 ml 提取液中。
（5）上述懸浮液在0℃，12000rpm下離心20分鐘，棄去上清液，沉淀懸浮于2 ml 提取液中，即為線粒體懸浮液。保存在冰箱中。
2．儀器安裝及耗O2量的測定
反應瓶主室中按下表加入反應液： 
如圖，安裝好測氧儀、氧電極、記錄儀。檢查儀器是否正常。在側臂中加入0.5 ml 線粒體懸浮液，插入氧電極，密閉反應瓶，待測氧儀穩定后，將側臂內線粒體懸浮液輕輕倒入反應室，在磁力攪拌器上攪拌或不斷地輕輕搖動反應瓶。20℃下反應10分鐘。記錄氧分壓的變化，由記錄曲線比較正常的線粒體和加抑制劑的線粒體耗O2的變化。
測氧裝置圖 3．測定ATP的形成
（1）DEAE──纖維素的再生：使用以后的纖維素先用0.5N NaOH溶液浸泡30分鐘－1小時，然后用布氏漏斗濾去NaOH溶液，再用0.5NHCl溶液浸泡30分鐘－1小時，用蒸餾水沖洗至中性，備用。
已處理好備用的DEAE──纖維素（DE－22），傾倒去過多的水，將纖維素攪拌后均勻地鋪在干凈的玻璃板上，然后輕輕振動玻璃板，使纖維素分布均勻、表面光滑。放于60℃處烘干備用。
（2）點樣：用血色素吸管吸取①標準APP10mm3，②反應液20mm3，③線粒體懸液20mm3，④反應10分鐘后的樣品20mm3分別在DEAE──纖維素薄層上點樣，用冷風吹干。
（3）展層：層析缸中倒入0.025N HCl，將纖維素薄層平放入內，使液面低于點樣線，蓋好蓋子，待前沿走到離薄層上端1 cm 時立即取出，用熱風吹干。 （4）風干后的薄層板在紫外分析燈下觀察形成的ATP。 實驗記錄及報告 
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