樓主的qq暫時加不上,我記下了,改天加。
以下是個人意見。
因為高拷貝質粒穩定性低,而且給宿主細胞的壓力大。
低拷貝數的質粒DNA在宿主細胞分裂前只能復制1~2次,而多拷貝數質粒可以在細胞分裂前復制成10~200拷貝。
高拷貝數的質粒稱為松弛型質粒(relaxed plasmid),獨立于細菌細胞而自主復制;低拷貝數的質粒一般是嚴緊型質粒(stringent plasmid),它們的復制隨細菌染色體的復制同步進行。
一般來說,外源基因的表達量隨拷貝數的增加而提高,但是當拷貝數很大時,拷貝數與發酵目標產物產率的這種關系卻不存在。這主要有兩方面的原因:一方面,高拷貝數時外源基因的表達量不再由質粒的拷貝數決定,可能是由轉錄和翻譯水平決定的;另一方面,高拷貝數的質粒往往很不穩定。由于質粒拷貝數的變化直接與基因目標產物的產率有關,因此對于重組蛋白的生產來說,質粒的拷貝數是一個非常重要的參數。
而且同一個細胞里一般不會同時有兩種不同的質粒,這是質粒不相容性(plasmid incompatibility)。在細菌細胞增殖過程中,其中必有一種會被逐漸排斥。所以要用純化過的低拷貝質粒。
低拷貝在鳥槍法測序中很常用的。
隨機測序戰略又稱鳥槍戰略(shotgun strategy),此策略是將人 類基因組DNA用機械方法隨機切割成2Kb左右的小片段,把這些DNA片段裝入適當載體,建 立亞克隆文庫,從中隨機挑 取克隆片段.最后通過克隆片段的重疊組裝確定大片段DNA序列.?
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