生化分析儀檢測順序大有講究!

在使用全自動生化分析儀的過程中，我們經常會遇到這樣的情況：單獨做某個項目時結果沒有問題，可是將它與某些項目組合在一起時，結果卻出現異常。其中的原因是全自動生化分析儀的清洗系統隨著儀器使用時間的累加，清洗效果逐漸下降，試劑交叉污染的程度增加所致。全自動生化分析儀各試劑間的相互干擾影響到了檢驗結果的準確性和可靠性，給檢驗結果帶來很大的偏差，有時甚至會誤導臨床醫生，延誤患者的病情，造成嚴重后果。因此避免試劑間的干擾，在日常生化檢驗工作中也就非常重要和迫切。

一、試劑間相互干擾的類型

試劑中含有下一個檢測所要測定的底物，或是含有的某種試劑成分與下一反應的底物有作用，因而直接干擾下一反應的測定結果；另一種原因是該試劑所引導的反應對下一個項目的反應進程帶來間接的干擾，因為在有試劑污染的情況下，下一個測試所測定的是前后兩個項目反應的綜合作用結果。部分已知的常用試劑間可能產生的相互干擾如下：

1.pH值改變：試劑中反應緩沖液之間因儀器攜帶污染而使下一反應的pH值改變，使下一反應達不到最佳狀態。如雙縮脲法測血清總蛋白，若其他條件相同，反應在堿性(pH值8-9)條件時，蛋白肽鍵（—CONH）才都能與堿性銅溶液作用生成紫色反應，完全測出血清蛋白的總量。若pH＜8時，總蛋白測定結果偏低，直接影響球蛋白、白蛋白/球蛋白的結果。酶活力測定在最適pH值時，反應最快，靈敏度最高，但是因為緩沖能力有限，可因攜帶污染使酶促反應出現無效值。大多數酶反應pH值在6.0-7.5之間；ALP、γ-GT、LDH須在堿性條件下最適宜。

2.TG、T-CH、UA、MG試劑中含有膽酸鹽，對循環酶法測定膽汁酸能產生嚴重干擾。

3.ALT（IFCC）、AST（IFCC）試劑中含有高活力LD成分，有可能會對LD的測定帶來干擾。

4.CK（NAC-activated）、CK-MB（NAC-activated）試劑中含有Glu成分，其分析方法的原理中包含Glu的已糖激酶(HK)反應過程，因此可能對Glu測定帶來干擾，尤其對Glu的HK法測定可能帶來嚴重干擾。

5.Glu(HK)、CK（NAC-activated）、CK-MB（NAC-activated）、TG、HDL-C、LDL-C(直接法)等試劑中使用了鎂鹽，可能會對其后的Mg2+ 測定帶來干擾；TP試劑中高濃度的Cu2+對Mg2+測定也會產生干擾。

6.ALT、AST、LDH、CK、CK-MB、UA、r-GT、TP，LDH等試劑由于試劑中含有K+或者與K+的酶法測定有相同或相反的進程,對K+的酶法測定產生干擾。

7.ChE(Butyrylthiocholine)、TC(ChOD-PAP)、Glu(GOD-PAP)、 UA(Uricase)、 α-HBDH(DGKC)等試劑使用磷酸緩沖液，可能會對無機磷的測定帶來干擾。

8.Mg2+試劑 (Calmagite)中含有EGTA成分，為Ca2+絡合劑，可能對Ca2+的測定帶來干擾。

9.CK檢測不應在ALP、Ca檢測之前，因CK反應液中加入EDTA-Na，能抑制ALP活性，結合Ca而使結果偏低。

10.BUN酶法測定因谷氨酸脫氫酶（GLDH）消耗NADH，不能放在底物NADH如ALT、AST項目前檢測。

二、干擾的排查和發現

事實上各個廠家所提供的產品說明書常不能夠全面反映試劑組成的情況，而生化反應的影響因素又是相當復雜的。因此，通過實驗發現試劑交叉污染可能帶來的干擾顯得更加重要。具體可以通過以下幾個試驗來排查和發現試劑間可能發生的干擾。

1．將某一試劑作為樣本進行全套項目測定，考察結果的情況，進而確定發生試劑交叉污染時造成直接干擾的項目；雙試劑的R1、R2兩種都要做，這樣在解決干擾時有針對性。

2．1 份樣本分為兩份，一份加生理鹽水或其他適當的稀釋液，另一份加等量的試劑，同時測定、考察結果的變化，進而確定可能發生試劑交叉污染時造成干擾的項目。

3．懷疑Ａ項試劑對Ｂ項目存在干擾，可以用樣本先單做Ｂ項目若干次；然后先做Ａ項目，接著做Ｂ項目若干次。通過統計學分析，可以知道Ａ試劑通過試劑針對Ｂ項目的干擾程度。

三、干擾的消除

通過以上常見試劑間相互干擾的原因的分析及試劑干擾的排查的試驗，應可以有針對性采取一些措施消除試劑間的干擾，常用的方法有下面幾種：

1．為減少試劑間的相互干擾，應定期對儀器進行適當的保養，如更換管道，用去污劑、酸性洗液清洗比色杯，用去污劑擦清試劑針，用苯甲醇擦洗攪拌棒等。

2．合理安排檢測項目的順序：一般在安排項目順序時要求兩個項目間至少要有一個非干擾項目，而最徹底的做法則是將被干擾項目置于干擾項目之前，以消除干擾發生的可能。同時要求檢驗人員對儀器的工作狀態要了如指掌，并在一個樣本的項目選擇或一個樣本的最后一項與下一樣本的第一個項目選擇時對于試劑交叉污染的可能性加以考慮，合理安排項目順序，以便得到更為合理的結果。

對常見的生化項目可以按以下順序安排檢測：P、Alb、DBIL、TBIL、K、Ca、CK、TBA、TG、AFU、ALT、CK-MB、APOA1、T-CH、APOB、Cl、HDL-C、LP（a）、AST、GPDA、AMY、LDL-C、BUN、UA、CHE、ADA、r-GT、Mg、Na、ALP、LDH、GPDA、TP、Cr。

3．一些生化分析儀還有額外的沖洗功能,可以在被干擾項目檢測前對試劑針,比色杯用酸性洗液、堿性洗液進行２次或多次沖洗,以減少項目間的交叉污染。

4．有的全自動化分析儀器有不同的通道,可以將有干擾的項目排在不同的通道中檢測。

5．選用具有抗交叉污染的試劑盒：如在游離膽固醇試劑中添加膽固醇酯抑制劑，以減少膽固醇酯酶水解膽固醇酯引起對游離膽固醇測定的污染。

通過以上幾種方法,大部分試劑間的交叉污染能夠被解決,實際工作中，用全自動生化分析儀進行連續的多個項目的測定，每個反應的詳細過程難以探知，因此要求我們在實際工作中必須對生化分析儀的工作原理，方法，流程，狀態非常了解，還須對試劑的組成，反應原理作深入的分析，理論分析結合實際應用,方可以摸索出一套符合本單位工作的方法。