液相色譜柱的保養方法

此法適用于成都摩爾科學儀器有限公司GP-C18、HP-C18、BR-C18、Bio-C18和GP-C8或者其他公司品牌的類似色譜柱。

一、    新柱活化

由于色譜柱由生產廠家實驗室測試完畢密封好后到達您的手中可能經過了一段時間，因此必須對您剛拿到手的柱子進行活化處理：首先，配好65%乙腈/水或者純甲醇溶劑備用，所有進入HPLC儀器的溶劑必須經過0.2um或者0.45um過濾膜過濾并脫氣；再按柱子的正確方向連接柱子進口端(連接時注意一定要把管路的端口抵緊柱子的進口以免產生死空間發生漩渦效應降低柱效), 出口端先不接檢測器。先以0.1~-0.2ml/min的流速沖洗，等看到有液體從柱子中流出后，持續10mins之后再接上檢測器，以循序漸進方式將流速調至1.0ml/min(LC/MS柱子應以0.2ml/min的流速進行),繼續活化2小時。

二、    柱子使用

1、   首先要確認您所要分析的樣品流動相的pH范圍是否在您的柱子的pH范圍之內，以免損壞柱子硅膠！

2、   接下來就是用你做樣品的流動相去平衡柱子，如果您的流動相中含有緩沖鹽溶液，在平衡柱子之前務必要先用5％的甲醇(乙腈)/水去過渡10倍柱體積(150x4.6mm柱子約為30ml，250x4.6mm柱子約為45ml；下同)以上，再用帶鹽的流動相去平衡柱子足夠的時間(直到基線非常平穩為止)，之后方可進樣分析。

3、   無論您分析何種樣品，都會由于各種原因樣品中總有部分雜質，因此建議您在進樣前在柱子前端加接保護柱以保護您那昂貴的分析柱，或者用0.2um或 0.45um針頭過濾器過濾樣品后方進樣分析！

三、    柱子清洗

分兩種情況進行：

1、  如果您的樣品分析只用到一般的甲醇，乙腈和水的流動相(包括流動相里面加了點酸)，在做完樣品后可直接用65％的乙腈/水或者純甲醇進行清洗10倍柱體積即可保存(如果時間有限，可視情況在儀器能承受的范圍內加快流速******為2ml/min)；

2、  如果您的樣品分析用到了含緩沖鹽或者酸或者離子對試劑的流動相，在做完樣品后的清洗必須按照下列2個步驟進行清洗柱子(不論您的柱子是否可以耐純水的極性柱子還是一般的通用性柱子)：

a、***重要的步驟——用5％的乙腈(甲醇)/水，清洗20倍柱體積溶劑以上，1~2ml/min(根據時間自由調節流速：如果因為時間來不及而清洗不了那么長時間，可以適當加大流速，比如1.5 or 2ml/min；LC/MS柱子應以0.2~0.5ml/min的流速進行)，

b、65~90%的乙腈（甲醇）/水或者純甲醇/乙腈，清洗5~10倍柱體積，1~2ml/min。

四、柱子的再生

色譜柱屬于色譜分析的常用消耗品，它是有壽命的；但它壽命的長短與我們的樣品處理程度、有無加保護柱以及清洗是否恰當和徹底緊密相關！！！當柱子在使用一段時間以后，它的柱壓可能升高，柱效可能降低，這時如果我們對柱子進行再生，它的壽命也許會得到一定的延長。首先把柱子的方向顛倒過來（只限于成都摩爾科學儀器有限公司的色譜柱，其他公司的柱子不保證），

一、然后具體按如下方法進行：

1、5％的乙腈/水清洗20倍柱體積，1ml/min(剛開始以0.1ml/min運行，慢慢上升；下同)；

2，四氫呋喃(THF，色譜級)過柱30mins，1ml/min；

3，65~90％的乙腈（甲醇）/水 或者純甲醇(乙腈)，清洗10倍柱體積，1ml/min。

二、蛋白污染再生：0. 1%的三氟乙酸水溶液:異丙醇（4 : 1,v/v）→乙腈： 異丙醇（1 : 2,v/v, 內含0. 1% 三氟乙酸）→水：異丙醇( 1 : 4, V/V) ，分別沖洗10～20倍柱體積。（注意每項過渡時，壓力的控制，壓力******控制在1500 psi以下，根據柱子的具體情況請自己優化流速）。