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  • 發布時間:2019-04-10 18:15 原文鏈接: 植物組織化學顯微鏡標本片制作方法_組織離析法

    實驗方法原理

    用一些化學藥品配成離析液,便組織細胞的胞間層溶解,細胞彼此分離,獲得分散的、單個的完整細胞,以便觀察不同組織的細胞形態和特征。經離析制備的材料可制作臨時裝片觀察,也可制成永久玻片標本長期便用。

    實驗材料

    植物組織

    試劑、試劑盒

    離析液

    儀器、耗材

    玻片鑷子

    實驗步驟


    1 鉻酸-硝酸離析法


    適用于木質化的組織,如導管、管胞、纖維等。離析液由 10%鉻酸和 10%硝酸等量混合而成。具體步驟是將植物材料(如木材、枝條、果殼等)先切成火柴棒粗細、長約 1cm 的小條或小塊,放人小玻璃管中,加人離析液,其量約為材料的 20 倍,將口蓋嚴塞緊,放在30-40℃的溫箱中,經 1-2d。具體浸漬的時間可因材料塊的大小而不同,如果兩天以后仍未分離,則可換新的離析液繼續浸漬。草本植物可不必加溫。


    檢查材料是否離析:以細胞間的胞間層溶解、細胞彼此能夠分開為宜。可取出材料少許放在載玻片上的水滴中,加蓋破片,用滴管的橡皮頭輕輕敲壓,若材料分離,表示浸漬時間已夠。這時倒去離析液,用清水浸洗已離析好的材料。將玻璃管靜置,待材料下沉后,再倒去上清液,如此反復多次,至沒有任何顏色為止(如有離心機,可將材料轉人離心管,用離心機洗酸更為迅速),然后轉移到 70%酒箱中保存備用。需要時,可按臨時裝片法制片觀察或制作成永久性的玻片標本。


    2. 鹽酸-草酸按離析法


    這種方法較前面的方法緩和,適用于草本植物的髓、薄壁組織和葉肉組織等柔軟材料。具體方法是:把材料切成小塊,約 1cmx0.5cmx0.2cm 大小,放入 3:1 的 70%或 90%酒精和濃鹽酸中。若材料有空氣,應抽氣,抽氣后更換一次離析液。 24min后,用水清洗干凈。放入 0.5%草酸按水溶液中,時間的長短視材料的性質而定。可以每隔 1-2d 作檢查。其余方法同上。


    3 硝酸離析法


    適用于木材堅硬的材料,離析液為 30%-40%的硝酸液。離析時可將材料依上法切成小段,放人離析液中,然后將盛有材料的燒杯在酒精燈上加熱,煮半小時以上,當發現材料松軟時,即可倒去離析液,用水洗 5-6 次,然后貯載在 70%酒精中備用。


    4 氫氧化鈉透明離析法


    此法是目前最簡單的透明、離析柔軟或較堅硬植物材料的方法。材料經固定以后,投入 5%氫氧化鈉水溶液中,在溫度為 50℃左右恒溫下處理 24-48h。如果離析液發生混濁時,須更換 1-2 次離析液。離析較堅硬的材料時,氫氧化鈉的濃度應提高至 6%-10% 。

    展開 


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