一、還原1.將蛋白質溶解在 0.2mol/L 碳酸氫銨中，終濃度為 10~20mg/mL。 2.加人β-巰基乙醇，其濃度在 1%~5% 之間（體積分數）。 3.在溶液上方吹掃氮氣以置換氧氣，蓋上試管，在室溫下孵育付夜 4.用 SpeedVac 濃縮器干燥樣品。加熱樣品會有助于碳酸氫銨揮發。 二、溴化氰切割5.將干燥的樣品（10~20 mg/mL 重新溶解于 70% 的甲酸中。 6.在蛋白質溶液中直接加入固體溴化氰（每毫克蛋白質中加人 2 mg 溴化氰）。 對于很少量的蛋白質，加入一小塊溴化氰即可。 溴化氰的加人量通常是甲硫氨酸殘基的 20~100倍，也就相當于蛋白質的量和溴化氰的量大致相同。 7.蓋上試管，使反應在室溫避光條件下進行 18~20 h。 8.用 5 倍體積的水稀釋反應混合物，以終止反應；在 SpeedVac 濃縮器中，通過冷凍干燥作用除去多余的試劑。 產物可以通過液相層析或凝膠電泳分離（或-20°C 儲存）。 9.為了除去痕量溴化氰污染，把相關器具（如藥匙、試管）浸在次氯酸鈉溶液中，持續幾分鐘直到停止冒泡。
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