新冠病毒各類檢測方法異同（二）

• 酶聯免疫吸附法（ELISA）

ELISA是一種結合抗原、抗體特異性反應和酶對底物高效催化作用的高敏感性免疫學實驗技術。測定時，受檢的標本與固相載體表面的抗原或抗體起反應。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與液體中的其他物質分開。再加入酶標記的抗原或抗體，也通過反應結合在固相載體上。固相上的酶量與標本中的受檢物質的量成比例。加入酶反應底物后，底物被催化成有色產物，產物的量與標本中受檢物質的量直接相關。所以，可根據呈色的深淺進行半定量或定性分析。該檢測方法靈敏度較高，載體標準化難度較低，但檢測速度慢、易污染、步驟較為繁瑣。在實際應用中，需要根據抗原抗體的特性設計不同的檢測法，目前有雙抗體夾心法、免疫抑制法、競爭法、直接法&間接法等類型。

• 膠體金免疫層析法
  

是以膠體金為示蹤標志物，應用于抗原抗體檢測的一種新型免疫標記技術，氯金酸(HAuCl4)在還原劑作用下，可聚合成一定大小的金顆粒，形成帶負電的疏水膠溶液。由于靜電作用而成為穩定的膠體狀態，故稱膠體金。膠體金試紙，是將膠體金標記的生物大分子在PVC材質的試紙固定，留加樣孔，并設檢測線和質量控制線。在加樣孔上加入樣品后，再滴加液體介質，試紙上進行層析。根據試紙上的免疫反應發生結果，即膠體金位置是否有紅色條帶出現判斷檢測結果。

該方法無需特殊處理標本，僅需一滴血即可在15 min內通過肉眼觀察獲取檢測結果，突破了現有檢測技術對人員、場所的限制，縮短檢測時間，操作方便快速，在基層醫療單位及現場檢測中廣泛使用。目前針對新型冠狀病毒，已經報道的有兩種膠體金試紙，一種是檢測新型冠狀病毒的抗原-雙抗體夾心法，另一種是檢測患者血液里特異性針對新型冠狀病毒的IgM抗體-IgM捕捉法。在疫情爆發期，需要大規模做陽性檢測時，適合使用總抗檢測，同時聯卡操作也比較簡單，只需要操作一次，而分開檢測需要滴加兩次樣，用兩次卡。

• 化學發光免疫分析法

化學發光免疫分析法是將高靈敏度的化學發光測定技術與高特異性的免疫反應相結合，用于各種抗原、抗體、激素等檢測。該法靈敏度高于ELISA，具有特異性強、線性范圍寬、結果穩定、操作簡化等特點，廣泛應用于臨床標本的檢測。但是該方法對設備、操作、使用環境的要求比較高，使用時需要配套的化學發光儀器。

抗體檢測的靈敏度和特異度:靈敏度反映診斷試驗檢出感染者的能力，若過低，會出現較多假陰性結果，影響疾病的診斷、干預和預后，嚴重可導至患者過早死亡;特異度衡量診斷試驗正確判斷非感染者的能力，若過低，則會出現較多假陽性結果，導至醫療資源的浪費，并造成患者及群眾的焦慮和恐慌。因此，具有較高靈敏度和特異度是抗體檢測技術的應用基礎。

1.3

不同檢測方法優缺點對比

與抗體血清學檢測相比，核酸檢測能夠檢測到處于窗口期的患者，及早發現感染者，是新型冠狀病毒檢測的“金標準”，但是對檢測設備或平臺要求較高，高靈敏度的RT-PCR儀價格昂貴，對實驗室的潔凈度和操作人員要求也較高。此外，核酸檢測耗時較長，考慮到樣本運輸、樣本積壓的情況，通常最快24小時才可以報告結果。

與核酸檢測相比，抗體血清學檢測的血液標本更易獲取且標本質量有保證、操作簡單快捷、很大程度上降低了醫護人員在標本采集和檢測過程中被感染的風險、更易于基層實驗室展開篩查工作等。如果說核酸檢測病毒的核糖核酸(RNA)，是病毒存在的直接證據，那么抗體檢測的就是患者血液中被刺激產生的抗體，是間接證據，對臨床有提示作用。當核酸檢測陰性時，將IgM和IgG抗體檢測增加進去，可以彌補核酸檢測容易造成漏診的缺點。

目前市場上主流的抗體檢測方法學是化學發光，但化學發光平臺做新冠試劑并沒有優勢，主要因為該方法對設備、操作、使用環境的要求比較高。對比核酸檢測，化學發光的核心優勢就是取樣及操作簡易，但沒有快速檢測的優勢。針對于普通篩查或者說針對于非發達國家，膠體金檢測方法對人員、場地、設備要求都非常低，適用于大規模的快速檢測。國際企業如羅氏、雅培等在膠體金方面是沒有技術儲備的，實際上全球的膠體金檢測(包括新冠肺炎、傳染病、流感、瘧疾、性病等)大部分的供應量還是在中國。