放射免疫對流電泳實驗

實驗方法原理 將放射性元素標記的抗體(或抗原)與相應的抗原(或抗體)沉淀時，沉淀線通過自顯影而證實。所謂自顯影，就是通過復合物中的標記同位素在蛻變過程中放出的射線，作用于感光材料的鹵化銀晶體而產生潛影，再經過顯影把“像”顯示出來。這樣,能檢出肉眼看不見的沉淀線，從而提高反應的敏感性，這種方法可應用于凝膠中的所有反應。

實驗材料 放射性同位素標記的抗原 抗體

試劑、試劑盒 顯影液定影液

儀器、耗材 X—射線膠片全色膠片電泳儀電泳槽

實驗步驟

一、材料

1.  放射性同位素標記的抗原或抗體

2.  X—射線膠片或全色膠片

3.  顯影液與定影液

4.  其它同對流免疫電泳

二、操作方法

1.  按對流免疫電泳制備凝膠板并打孔。

2.  加樣陰極端孔內加抗原,陽極端孔內加抗體。在加被檢抗體樣品時，迅速加入標記抗原(2 000~3 000 cpm)，并使之混合，勿使抗原吸收后再加標記抗原，以免由于標記原的滯面而形成假陽性。

3.  電泳電流2.6 cm×7.5 cm的小板用4 mA。

4.  電泳后，平板浸在3%HCl中漂洗8 h，換液2次。

5.  用流水漂洗過夜。

6.  干燥室溫或鼓風機吹干。

7.  曝光在暗室將膠片切成與平板一樣大小，然后將藥面密接凝膠面，再在膠片上壓一張玻板，用黑布包嚴，皮筋扎緊，曝光時間與所用同位素及保存期有關。181I，一周內5 h~10 h；1~2周內24 h；2~3周內48 h。125I，在2個月內10 h。

8.  沖洗全色膠片沖片方法,水洗、20℃顯影10min、水洗、定影、水洗、涼干,觀察結果。

三、結果判定

在抗原抗體孔之間形成一條清晰的黑色影像者，判為陽性。