為了提高轉化效率，實驗中要考慮以下幾個重要因素：
(1)細胞生長狀態和密度 不要用經過多次轉接或儲于4℃的培養菌，最好使用從單克隆菌落制備的新鮮菌液，細胞生長密度以剛進入對數生長期時為好，可通過監測培養液的 OD600來控制。DH5α 菌株的OD600為0.5時，細胞密度在5×10?個/mL 左右(不同的菌株 情況有所不同),這時比較合適。密度過高或不足均會影響轉化效率。
(2)質粒的質量和濃度 用于轉化的質粒DNA 應主要是超螺旋態 DNA(cccDNA) 。 轉化效率與外源DNA 的濃度在一定范圍內成正比，但當加入的外源 DNA 的量過多或體積 過大時，轉化效率就會降低。1ng 的 cccDNA 即可使50μL 的感受態細胞達到飽和。 一般情 況 下 ，DNA 溶液的體積不應超過感受態細胞體積的5%。
(3)試劑的質量 所用的試劑，如CaCl? 等最好是最高純度的，并用超純水配制，過濾除菌后分裝保存于4℃冰箱備用。
(4)防止雜菌和雜 DNA 的污染 整個操作過程均應在無菌條件下進行，所用器皿，如離心管，tip 頭等最好是新的，并經高壓滅菌處理，所有的試劑都要滅菌，且注意防止被其他試劑、DNA 酶或雜DNA 所污染，否則均會影響轉化效率，為以后的篩選、鑒定帶來不 必要的麻煩。
