學鑒定試驗操作要點氫氧化鉀拉絲試驗：
(1)原理：革蘭陰性的細胞壁在稀堿溶液中易于破裂，釋放出未斷裂的DNA螺旋，使氫氧化鉀菌懸液呈現粘性，可用接種環攪拌后拉出粘絲來，而革蘭陽性細菌在稀堿溶液中沒有上述變化。
(2)方法：取1滴40g/L氫氧化鉀水溶液（應新鮮配制）于潔凈玻片上，取新鮮菌落少許，與氫氧化鉀水溶液攪拌混勻，并每隔幾秒鐘上提接種環，觀察能否拉出粘絲。
(3)結果：用接種環拉出粘絲者為陽性，仍為混懸液者為陰性。
(4)應用：主要用于革蘭陰性菌與易脫色的革蘭陽性菌的鑒別。大多數革蘭陰性菌于5~10s內出現陽性反應，有的則需30~45s，假單胞菌、無色桿菌、黃桿菌、產堿桿菌、莫拉菌等大多數在10s內呈陽性，不動桿菌、莫拉菌反應較慢，大多數菌株在60s內出現陽性，而革蘭陽性菌在60s以后仍為陰性。
注意：
1.試驗一般使用3-5%KOH%較好,常用4%比較方便(用V-P反應用40%KOH稀釋10倍即可）。
2.4%KOH量不能太多，菌量不能太少，尤其不動桿菌，4%KOH要少一點，菌要多一點，否則易導致陰性。
3.要用新鮮培養物。
4.對于不動桿菌，因不容易拉起絲，不容易脫色，所以容易誤認為陽性菌，操作時應講究技巧：
用少量的5%KOH，取多量的細菌充分研磨，還需要將菌用環拖到KOH邊緣處拉絲,即可出現絲狀物(即陽性)，切不可急躁。
5.幾乎所有陽性菌對vancomycin敏感.所以可結合萬古霉素敏感試驗區分革蘭陰性和陽性菌，前者耐藥后者敏感（但有些陽性菌耐萬古霉素，如：鶉雞腸球菌、鉛黃腸球菌、部分紅斑丹毒絲菌、乳桿菌、星形奴卡氏菌、鏈霉菌）。因幾乎所有陰性菌對colistin敏感，所以可以利用多粘菌素敏感試驗區分陰陽性菌，但有些陽性菌可以出現敏感現象，這可以用于區分某些葡萄球菌：金黃色葡萄球菌對多粘菌素B耐藥，中間葡萄球菌對多粘菌素B敏感。