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  • 發布時間:2019-04-21 22:02 原文鏈接: 實驗室常用技術參數資料(二)2

      4.0.1mol/L腺苷三磷酸(ATP)溶液

      【配制方法】

      在0.8ml水中溶解60mg ATP,用0.1mol/L NaOH調至pH值至7.0,用蒸餾水定容1ml,分裝成小份保存于-70℃

      5.10mol/L乙酸酰溶液

      【配制方法】

      把770g乙酸酰溶解于800ml水中,加水定容至1L后過濾除菌。

      6.10%過硫酸銨溶液

      【配制方法】

      把1g過硫酸銨溶解于終量為10ml的水溶液中,該溶液可在4℃保存數周。

      7.BCIP溶液

      【配制方法】

      把0.5g的5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸二鈉鹽(BCIP)溶解于10ml 100%的二甲基甲酰胺中,保存于4℃

      8.2×BES緩沖鹽溶液

      【配制方法】

      用總體積90ml的蒸餾水溶解1.07g鹽溶液BES[N,N-雙(2-羥乙基)-2-氨基乙磺酸]、1.6g NaCl和0.027g Na2HPO4,室溫下用HCl調節 該溶液的pH值至6.96、然后加入蒸餾水定容至100ml,用0.22μm濾器過濾除菌,分裝成小份,保存于-20℃。

      9.1mol/L CaCl2溶液

      【配制方法】

      在200ml蒸餾水中溶解54g CaCl2·6H2O,用0.22μm濾器過濾除菌,分裝成10ml小份貯存于-20℃。

      【注意】

      制備感受態細胞時,取出一小份解凍并用蒸餾水稀釋至100ml,用Nalgene濾器(0.45μm孔徑)過濾除菌,然后驟冷至0℃。

      10.2.5mol/L CaCl2溶液

      【配制方法】

      在20ml蒸餾水中溶解13.5g CaCl2·6H2O,用0.22μm濾器過濾除菌,分裝成1ml小份貯存于-20℃。

      11.1mol/L二硫蘇糖醇(DTT)溶液

      【配制方法】

      用20ml 0.01mol/L乙酸鈉溶液(pH5.2)溶解3.09g DTT,過濾除菌后分裝成1ml小份貯存于-20℃。

      【注意】

      DTT或含有DTT的溶液不能進行高壓處理。

      12.脫氧核苷三磷酸(dNTP)溶液

      【配制方法】

      把每一種dNTP溶解于水至濃度各為100mmol/L左右,用微量移液器吸取0.05mol/l Tris堿分別調節 每一dNTP溶液的pH值7.0(用pH試紙檢測),把中和后的每種dNTP溶液各取一份作適當稀釋,在下表中給出的波長下讀取光密度計算出每種dNTP的實際濃度,然后用水稀釋成終濃度為50mmol/L的dNTP,分裝成小份貯存于-70℃。

    堿基

    波長(nm)

    消化系數(ε)[L/(mol·cm)]

    A

    259

    1.54×104

    G

    253

    1.37×104

    C

    271

    9.10×103

    T

    260

    7.40×103

      比色杯光徑為1cm時,吸光度=εM

      13.0.5mol/l EDTA(pH8.0)溶液

      【配制方法】

      在800ml水中加入186.1g二水乙二胺四乙酸二鈉(EDTA-Na·2H2O),在磁力攪拌器上劇烈攪拌,用NaOH調節 溶液的pH值至8.0(約需20g NaOH顆粒)然后定容至1L,分裝后高壓滅菌備用。

      【注意】

      EDTA二鈉鹽需加入NaOH將溶液的pH值調至接近8.0,才能完全溶解。

      14.溴化乙錠(10mg/ml溶液)

      【配制方法】

      在100ml水中加入1g溴化乙錠,磁力攪拌數小時以確保其完全溶解,然后用鋁箔包裹容器或轉移至棕色瓶中,保存于室溫。

      【注意】

      小心:溴化乙錠是強誘變劑并有中度毒性,使用含有這種染料的溶液時務必戴上手套,稱量染料時要戴面罩。

      15.2×HEPES緩沖鹽溶液

      【配制方法】

      用總量為90ml的蒸餾水溶解1.6g NaCl、0.074g KCl、0.027g Na2PO4·2H2O、0.2g葡聚糖和1gHEPES,用0.5mol/l NaOH調節 pH值至7.05,再用蒸餾水定容至100ml。用0.22μm濾器過濾除菌,分裝成5ml小份,貯存于-20℃。

      16.IPTG溶液

      【配制方法】

      IPTG為異丙基硫代-β-D-半乳糖苷(分子量為238.3),在8ml蒸餾水中溶解2g IPTG后,用蒸餾水定容至10ml,用0.22μm濾器過濾除菌,分裝成1ml小份貯存于-20℃。

      17.1mol/L乙酸鎂溶液

      【配制方法】

      在800ml水中溶解214.46g四水乙酸鎂,用水定容至1L過濾除菌。

      18.1mol/L MgCl2溶液

      【配制方法】

      在800ml水中溶解203.4g MgCl2·6H2O,用水定容至1L,分裝成小份并高壓滅菌備用。

      【注意】

      MgCl2極易潮解,應選購小瓶(如100g)試劑,啟用新瓶后勿長期存放。

      19.β-巰基乙醇(BME)溶液

      【配制方法】

      一般得到的是14.4mol/L溶液,應裝在棕色瓶中保存于4℃。

      【注意】

      BME或含有BME的溶液不能高壓處理。

      20.NBT溶液

      【配制方法】

      把0.5g氯化氮藍四唑溶解于10ml 70%的二甲基甲酰胺中,保存于4℃。

      21.酚/氯仿溶液

      【配制方法】

      把酚和氯仿等體積混合后用0.1mol/L Tris·HCl(pH7.6)抽提幾次以平衡這一混合物,置棕色玻璃瓶中,上面覆蓋等體積的0.01mol/l Tris·HCl(pH7.6)液層,保存于4℃。

      【注意】

      酚腐蝕性很強,并可引起嚴重灼傷,操作時應戴手套及防護鏡,穿防護服。所有操作均應在化學通風櫥中進行。與酚接觸過的部位皮膚應用大量的水清洗,并用肥皂和水洗滌,忌用乙醇。

      22.10mmol/L苯甲基磺酰氟(PMSF)溶液

      【配制方法】

      用異丙醇溶解PMSF成1.74mg/ml(10mmol/L),分裝成小份貯存于-20℃。如有必要可配成濃度高達17.4mg/ml的貯存液(100mmol/L)。

      【注意】

      PMSF嚴重損害呼吸道粘膜、眼睛及皮膚,吸入、吞進或通過皮膚吸收后有致命危險。一旦眼睛或皮膚接觸了PMSF,應立即用大量水沖洗之。凡被PMSF污染的衣物應予丟棄。

      PMSF在水溶液中不穩定。應在使用前從貯存液中現用現加于裂解緩沖液中。PMSF在水溶液中的活性喪失速率隨pH值的升高而加快,且25℃的失活速率高于4℃。pH值為8.0時,20μmmol/l PMSF水溶液的半壽期大約為85min,這表明將PMSF溶液調節 為堿性(pH>8.6)并在室溫放置數小時后,可安全地予以丟棄。

      23.磷酸鹽緩沖溶液(PBS)溶液

      【配制方法】

      在800ml蒸餾水中溶解8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,用HCl調節 溶液的pH值至7.4加水定容至1L,在15lbf/in2(1034×105Pa)高壓下蒸氣滅菌20min。保存于室溫。

      24.1mol/L乙酸鉀(pH7.5)溶液

      【配制方法】

      將9.82g乙酸鉀溶解于90ml純水中,用2mol/L乙酸調節 pH值至7.5后加入純水定容到1L,保存于-20℃。

      25.乙酸鉀溶液(用于堿裂解)

      【配制方法】

      在60ml 5mol/L乙酸鉀溶液中加入11.5ml冰乙酸和28.5ml水,即成鉀濃度為3mol/L而乙酸根濃度為5mol/L的溶液。

      26.3mol/L乙酸鈉(pH5.2和pH7.0)溶液

      【配制方法】

      在80ml水中溶解408.1g三水乙酸鈉,用冰乙酸調節 pH值至5.2或用稀乙酸調節 pH值至7.0,加水定容到1L,分裝后高壓滅菌。

      27.5mol/L NaCl溶液

      【配制方法】

      在800ml水中溶解292.2g NaCl加水定容至1L,分裝后高壓滅菌。

      28.10%十二烷基硫酸鈉(SDS)溶液

      【配制方法】

      在900ml水中溶解100g電泳級SDS,加熱至68℃助溶,加入幾滴濃鹽酸調節 溶液的pH值至7.2,加水定容至1L,分裝備用。

      【注意】

      SDS的微細晶粒易擴散,因此稱量時要戴面罩,稱量完畢后要清除殘留在稱量工作區和天平上的SDS,10%SDS溶液無須滅菌。

      29.20×SSC溶液

      【配制方法】

      在800ml水中溶解175.3g NaCl和88.2g檸檬酸鈉,加入數滴10mol/l NaOH溶液調節 pH值至7.0,加水定容至1L,分裝后高壓滅菌。

      30.20×SSPE溶液

      【配制方法】

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