理想的液相色譜流動相溶劑應具有黏度低、與檢測器兼容性好、易于得到純品和低毒性等特征。強溶劑使溶質在填料表面的吸附減少,相應的容量因子k降低;而較弱的溶劑使溶質在填料表面吸附增加,相應的容量因子 k 升高。因此,k 值是流動相組成的函數。塔板數 N一般與流動相的黏度成反比。所以選擇流動相時應考慮以下幾個方面。
(1)在選擇流動相時,一般采用色譜純試劑,必要時需進一步純化,以除去有干擾的雜質。因為在色譜柱整個使用期間,流過色譜柱的溶劑是大量的,如溶劑不純,則長期積累雜質而導致檢測器噪聲增加。
(2)流動相應不改變填料的任何性質。低交聯度的離子交換樹脂和排阻色譜填料有時遇到某些有機相會溶脹或收縮,從而改變色譜柱填床的性質。堿性流動相不能用于硅膠柱系統。酸性流動相不能用于氧化鋁、氧化鎂等吸附劑的柱系統。
(3)流動相必須與檢測器匹配。使用 UV 檢測器時,所用流動相在檢測波長下應沒有吸收或吸收很小。當使用示差折光檢測器時,應選擇折光系數與樣品差別較大的溶劑作流動相,以提高靈敏度。
(4)流動相的黏度要低(應<2cP,1cP=10-3Pa·s)。高黏度溶劑會影響溶質的擴散、傳質,降低柱效,還會使柱壓降增加,使分離時間延長。最好選擇沸點在100℃以下的流動相。
(5)流動相對樣品的溶解度要適宜。如果溶解度欠佳,樣品會在柱頭沉淀,不但影響純化分離,且會使柱子惡化。