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  • 發布時間:2020-04-13 22:26 原文鏈接: 如何選擇符合您需求的HPLC或UHPLC色譜柱?(二)

    圖3給出了鍵合相選擇能力的另一實例。

    一個分離是用C18鍵合相的UHPLC色譜柱完成,另一個分離是用C18-PFP鍵合相的UHPLC色譜柱完成。

    C18-PFP鍵合相提供的額外分離機制,使得總體分離效果更佳出色。

    圖 3:ACE Excel可以獲得卓越的分離度和峰形:藥物及其相關物質的UHPLC結果


    條件

    色譜柱尺寸:50 x 2.1mm

    流動相:

    A = 5mM甲酸(溶于水中)

    B = 5mM甲酸(溶于甲醇中)

    梯度:5分鐘內從3至100%B

    流速:0.6 mL/min

    溫度:40 ℃

    檢測:UV 254 nm

    樣品

    1. 對乙酰氨基酚

    2. 氫氯噻嗪

    3. 甲基苯基亞砜

    4. 甲基苯砜

    在C18 UHPLC色譜柱和C18-PFP色譜柱上同樣快速地產生色譜圖。

    然而,C18-PFP色譜柱可以為色譜峰對(13,14)和(15,17)提供更佳的選擇性,因此能夠提供優越的總體分離性能。

    2.ACE和ACE Excel硅膠基質固定相幾乎消除了硅醇基對色譜分離的不利影響,并且在為堿性化合物提供卓越峰形方面贏得了口碑。

    峰拖尾可以降低分離度,降低靈敏度,甚至干擾準確度和精密度(圖4)。

    峰拖尾有許多潛在的原因,但分離堿性物質時的主要原因是硅膠固定相載體顆粒表面上的酸性硅醇基與分析物上的氨基之間的相互作用(圖5)。

    圖 4:峰拖尾對分離度和靈敏度的影響


    隨著峰拖尾(Tf,拖尾因子)從1.0增加到2.0,分離度(Rs)從1.5下降到0.87。

    由于峰寬增加以及峰面積保持不變,靈敏度(峰高)也隨著峰拖尾的增加而下降。

    ACE色譜柱采用具有極低硅醇活性的超惰性硅膠制成。

    這種超純硅膠采用ZL技術進行有效鍵合和徹底封尾。

    導致這種硅膠基質的固定相幾乎消除了硅醇基對色譜分離的不利影響。

    ACE色譜柱的超惰性特性使其成為分離極性堿性化合物的理想選擇。

    當分離復雜堿性化合物時,與其他現代堿性去活色譜柱相比,ACE色譜柱總是能給出明顯更好的峰形和柱效(圖6)。

    圖 5:峰拖尾相互作用



    硅膠固定相載體表面上的酸性硅醇基可形成與堿性化合物相互作用的離子交換位點。

    這種離子交換的相互作用通常可以導致峰保留(二次保留),并當采用反相HPLC分離胺類化合物時引起峰拖尾。
    一種幾乎消除了硅醇基對色譜分離不利影響的硅膠基質固定相


    圖 6:峰拖尾比較

    條件

    色譜柱尺寸:50 x 2.1 mm

    流動相:40%甲醇,60%水

    流速:0.2 mL/min

    溫度:22oC

    樣品:吡啶


    報告了堿性化合物(吡啶)在各種常見C18色譜柱上的塔板數。

    在10%峰高下測量塔板數,以使峰拖尾納入在測量中。

    ACE C18-PFP由于其超惰性性質而達到了最高塔板數。

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