大分子物質的水解試驗

實驗概要

證明不同的微生物對復雜有機大分子的水解能力不同，從而說明不同的微生物有不同的酶系統。

實驗原理

細菌對大分子的淀粉、蛋白質和脂肪不能直接利用，必須靠產生的胞外酶，如淀粉酶、蛋白酶和脂肪酶將大分子物質分解。胞外酶能分泌擴散到細胞外，將物質分解成小單位如糖、氨基酸、甘油與脂肪酸。這些小單位的物質能被細菌吸收和利用。水解過程可通過底物的變化來證明，如細菌水解淀粉的區域，用碘測定不再產生藍色；水解明膠可觀察到明膠被液化；脂肪水解后產生脂肪酸改變培養基的pH，其中的中性紅指示劑使培養基從淡紅色變為深紅色。

主要試劑

油脂培養基，淀粉培養基，明膠培養基，革蘭氏染色用盧戈氏碘液（Lugol's iodine solution）等。

主要設備

無菌平皿，接種環和接種針

實驗材料

金黃色葡萄球菌，枯草芽孢桿菌，大腸桿菌，綠膿桿菌（Bacte-rium Pyocyaneum）斜面各一支；

實驗步驟

　　
1．油脂水解試驗

　　(1)將溶化的油脂培養基冷至45℃左右時，充分振蕩，使油脂均勻分布，用無菌操作倒入平皿中，待凝。

　　(2)將制成的平板用記號筆劃成兩半，一半接種金黃色葡萄球菌作為對照，另一半接種枯草芽孢桿菌作為試驗菌，均用無菌操作畫“ ”接種，如圖Ⅹ-1。

　　(3)將接種的平板倒置于37℃溫室中培養24小時。

　　(4)取出平板，觀察平板底層長菌的地方，如出現紅色斑點，說明脂肪被水解，為陽性反應。

　　
2．淀粉水解試驗

　　(1)將淀粉培養基溶化后，冷至45℃左右，以無菌操作制成平板。

　　(2)用記號筆將平板劃成兩半，一半接種大腸桿菌作為試驗菌，另一半接種枯草芽孢桿菌作為對照菌，均用無菌操作劃線接種，如圖Ⅹ-2。

　　(3)將上述已接種的平板倒置于37℃溫室中培養24小時。

　　(4)將已培養24小時的平皿取出，打開皿蓋，滴加少量盧戈氏碘液于平板上，輕輕旋轉平皿，使碘液均勻鋪滿整個平板。如菌苔周圍出現無色透明圈，說明淀粉已被水解。透明圈的大小、說明該菌水解淀粉能力的強弱。

　　
3．明膠液化試驗

　　(1)取三管明膠培養基，用記號筆標明各管接種的菌名。分別以無菌操作用接種針穿刺接種大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、綠膿桿菌。

　　(2)接種后，置20℃溫室中培養2—5天。

　　(3)觀察明膠培養基液化情況。

 
 　　結果

　　將結果填入下表。“ ”表示陽性；“-”表示陰性。

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