1.為移植開始培養基因修正的細胞,收獲 80%~90% 的匯合度的細胞。手術時,當麻醉和準備動物的時候準備好懸浮細胞(支持方案)。手術期間,每 30~60 min 重懸細胞。
2.每 160 g 體重用肌肉注射 0.25 ml 的麻醉液麻醉計時的懷孕鼠。刮腹部并用 75% 的乙醇消毒。用眼膏使小鼠眼睛保持濕潤。放置麻醉鼠在 37°C 加熱板,上面蓋消毒紙巾。
3.做剖腹產,移除子宮的角質。透照以確定胚胎解剖學結構并確定端腦的小囊泡和顱蓋的縫。參考產前的鼠腦圖譜。
4.用吸管輕輕吹打以重新分開細胞懸液。吸 1~3ul 至 5ul 漢密爾頓注射器,并避免氣泡。
5.需要慢速注射入腦的薄壁組織或胚胎腦室內。當注射完畢時,抬起針頭 1 mm,靜置 2 min,收針。
6.如果多于兩個注射點,重復第 4~5 步。之后重復注射步驟于每個胚胎。
7.把子宮角質重新放回腹部內。縫合并消毒。轉移媽媽至恢復籠,允許它恢復并生產。
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