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  • 發布時間:2019-03-29 22:15 原文鏈接: 哺乳動物組織的勻漿實驗_從組織勻漿液中去除黏蛋白

    實驗方法原理黏蛋白存在于大多數生物提取物(如黏膜)中,這使蛋白的純化工作更為復雜,因為黏蛋白會結合在層析填料上*從而引起層析柱的堵塞。用本方案可以從組織勻漿液中選擇性地除去黏蛋白,這一方案是為了分離和定性研究結腸黏膜的新生長因子而建立起來的。
    實驗材料

    動物組織

    試劑、試劑盒

    碳酸銨緩沖液PMSF

    儀器、耗材

    離心機

    實驗步驟


    1將從結腸上刮下來的黏膜放人5倍體積的碳酸鹽緩沖液(pH9.2,含抑胃肽酶和PMSF)中,使用Ultra-Turrex勻漿器勻漿。


    ②10000g離心20min,除去組織碎片。


    ③逐滴加入lmol/LHCl(約需100ml),緩慢(大于2h)調上清液的PH值至4.5,并不斷攪動。使黏蛋白形成絮狀沉淀。


    ④4℃:條件下10000g離心20min,以除去沉淀。上清液為粗提液,可以作為純化方案的原始材料。

    展開 


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