【基本原理】
選用兩株針對sIL-2R分子不同位點的單克隆抗體，即McAb1（包被抗體）與McAb2（酶標抗體）。先用McAb1包被固相載體，使待測sIL-2R與之特異性結合，然后再加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的McAb2，則形成McAb1-sIL-2R-HRP標記McAb2復合物，再加入HRP底物（鄰苯二胺），則酶催化底物而顯色，測定樣品與標準品OD值，繪制標準曲線，即可從標準曲線中查得待測樣品中sIL-2R含量。該法敏感性高，且特異、簡便、快速、取材容易，故較為常用。
【材料和試劑】
（1） 包被抗體（McAb1）：使用時用包被液作適當稀釋（如1：100）。
（2） 酶標抗體（McAb2）：以辣根過氧化物酶（HRP）標記。使用時用稀釋液做
適當稀釋，其稀釋度根據預試驗結果而定。
（3） sIL-2R標準品：已知含量的sIL-2R，使用時用稀釋液作倍比稀釋成7個濃度：1600u/ml， 800u/ml， 400u/ml， 200u/ml， 100u/ml， 50u/ml， 25u/ml
（4） 待測樣品：如血清、血漿、尿液、細胞培養上清液等均可用于檢測sIL-2。
（5） 陰性對照品：未免疫小鼠IgG
（6） （0.01mol/L， pH7.4的磷酸鹽緩沖液）
（7） 包被液（0.05 mol/L， pH9.6的磷酸鹽緩沖液）
（8） 稀釋液（含10% A的）
（9） 洗滌液（0.05% Tween20-）
（10） 底物緩沖液（0.1 mlo/L， pH5.0的檸檬酸-磷酸氫二鈉緩沖液）
（11） HRP底物：鄰苯二胺（OPD）
（12） 3% H2O2
（13） 底物顯色液（OPD-H2O2）：臨用前配制，4℃避光保
（14） 終止液（2 mol/L H2SO4）
（15） 96孔酶標板，酶標測定儀，495nm濾光片
（16） 其他：4℃冰箱，水浴箱，刻度吸管，毛細吸管，加樣器及吸頭
【操作步驟】
（1） 包被：將用包被液稀釋好的McAb1(5-10μg/ml)加入96孔酶標板，100μl/孔，置37℃ 2h后移置4°C過夜（16-72h）；
（2） 洗滌：將96孔酶標板傾去包被液，用洗滌液加滿各孔，置3min，然后棄去，反復洗滌3次
（3） 加樣（均設雙復孔）：
①將已知含量的sIL-2R標準呂用稀釋液作倍比稀釋后，分別加入1-7孔，100μl/孔，按濃度從低到高的順序依次加樣；
②第8孔加入待測樣品，100μl；
③第9孔加陰性對照血清（未免疫小鼠IgG），100μl；
④第10孔為空白對照（稀釋液），100μl；
（4） 加樣后，置室溫孵育1-2h；
（5） 洗滌3次，方法同前。
（6） 各孔加入HRP標記的McAb2，用稀釋液作適當稀釋其稀釋度根據預試驗結果確定，100μl/孔；
（7） 置37℃孵育1～2h；
（8） 洗滌3次，方法同前；
（9） 顯色：各孔加新鮮配制的OPD-H2O2顯色液，100μl/孔，置室溫或37℃下避光反應15-30min；
（10） 終止反應：各孔加2mol/L H2SO4，50μl/孔
（11） 測定OD值：用酶標測定儀以波長495nm測定各孔OD值。
【結果判斷】
（1） 空白對照及陰性對照孔應無色，各陽性孔呈現棕黃色，且sIL-2R標準品各孔呈明顯顏色由淺到深梯度改變。
（2） 繪制標準曲線：以標準品各稀釋度sIL-2R含量為橫座標（X），相應的OD值為縱座標（Y），在普通座標紙上繪制標準曲線。
（3） 根據待測樣品孔的OD值，在標準曲線上查得待測樣品sIL-2R含量。
【注意事項】
（1） 血清或血漿中殘存的凝塊或紅細胞須離心去除，勿用溶血或血脂過高的血清檢測sIL-2R。
（2） 待測樣品在4℃可放置一周，如不立即檢測應置于-20℃或-70℃冰箱中，且應避免反復凍融，宜分裝保存。
（3） sIL-2R標準品質量直接影響檢測結果的準確性，應注意商品試劑盒中的sIL-2R標準品可隨時間延長而降低效價。
（4） 疊氮鈉（NaN3）對辣根過氧化物酶有滅活作用，在本實驗系統中應避免使用。
（5） 底物顯色液應在臨用前配制，4℃避光保存，H2O2應置2-8℃，保存6個月以內。加入底物顯色15-30min后應立即測定OD值。
（6） 分別用加樣器頭吸取各份標本，避免相互交叉使用。
（7） 避免孔中有氣泡，以免影響所測OD值的準確性。
（8）
因不同來源的樣品，不同實驗室所測得的sIL-2R含量不同，故sIL-2R正常標準難以統一。可進行大樣本測定，以X+2SD確定自己實驗室各種來源檢測樣品的參考值范圍。在臨床觀察中，一般以sIL-2R水平升高有意義，故可設立X+2SD為正常值上限。一般用ELISA法測定血清時，sIL-2R水平＜200～300u/ml。