| 實驗步驟 | 材料與設備
SDS-PAGE 電泳裝置
聚丙烯酰胺小膠(10%)
分子量標準參照物
試劑
緩沖液 A
N-十二烷基肌氨酸鈉(SKL)(20% 水溶原液)
考馬斯亮藍(CBB) 染色液
脫色液
快速蛋白質斑點印跡試驗用試劑 (見 P.172)
(配方,見「試劑的配制」,PP.184~189)
操作程序
1) 第 2 次 2%D0C 懸液(見 p.149), 于離心前取 6x50-ul 等分試樣。然后將這些樣品用微型離心機全速離心 1 min, 棄上清。
2) 各沉淀物中分別加入 100ul 含 0%、0.1%、0.2%、0.3% 和 0.6%SKL 的緩沖液 A。沉淀物劇烈重懸后靜置 10 min, 再用微型離心機離心 lmin,取上清樣品,供快速蛋白質斑點印跡試驗用(見 PP.172-173),觀察沉淀物的多少。
3) 每份上清作 SDS 凝膠電泳,并與樣品 A、B—起做快速蛋白質斑點印跡試驗。
4) 作凝膠電泳分析時,于 10% 的 SDS 凝膠上,樣品 A、B、C、D 及 0.1%SKL 上清、0.2%SKL 上清、0.3%SKL 上清、0.4%SKL 上清、0.6%SKL 上清各加樣 20ul, 分子量標準參照物加樣 3ul,120V(20mA) 電泳約 60 min。
5) 凝膠用 CBB 染色液染色 30 min 后,置脫色液中漂洗、脫色,直至顯現條帶。
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