注：所有步驟應在無菌無毒的超凈工作臺進行。胰蛋白酶處理時間不宜過長。
取離體的動物組織，器官或細胞，剪碎并加入胰蛋白酶分解成單個細胞，配置形成細胞懸液。
制備動物細胞培養液體培養基（需加入血清，保證無菌無毒），將細胞接種至培養基，放入二氧化碳培養箱中進行初代培養。
當細胞增殖達到一定程度，出現接觸抑制現象時，用胰蛋白酶再次處理，并用細胞懸液吹打貼壁生長的細胞。進行細胞計數。
依照計數結果，分瓶培養，進行傳代培養。獲得細胞系或細胞株。
