凝血酶原時間(PT)測定實驗主要用于(1)外源性系統理想和常用的篩選實驗(2)外源性途徑凝血固定做定量試驗(3)口服抗凝劑治療的監控。
| 實驗方法原理 | 待測血漿加入過量的含鈣組織凝血活酶,重新鈣化的血漿在組織因子存在時激活因子成為X成為Xa。后者使凝血酶原轉變為凝血酶,凝血酶使纖維蛋白原轉變為凝血不溶性纖維蛋白,測定凝固所需時間、即為待測血漿凝血酶時間(PT)、PT測定是外源性系統理想和常用的篩選實驗,也可作為外源性途徑凝血固定做定量試驗,同時也可用于口服抗凝劑治療的監控.標本的來源與保存:
靜脈采血,置于含有1/10體積0.109mol/L枸櫞酸鈉抗凝液(1份抗凝液+9份全血)的塑料管或硅化玻璃管中,輕輕顛倒混勻.3000rpm(或2500)離心15分鐘,收集上層液(血漿,黃色),標本在不同條件下保存時間如下:-80℃保存,不宜超過30天,一20℃保存,不宜超過14天,2一8℃保存,不宜超過6小時,22-24℃保存,不宜超過2小時測定. |
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| 實驗材料 | 血漿 |
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| 試劑、試劑盒 | PT試劑 |
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| 儀器、耗材 | 蒸餾水燒杯一次性注射劑 |
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| 實驗步驟 | 1. 試劑重建:
于保存每瓶PT試劑加人2.0ml蒸餾水輕搖溶解.注意:試劑溶解后2-8℃可保存7天,室溫(15-25℃)可保存24小時,勿凍結.
2. 手工測定:
取待測血漿(參比血漿)0.1ml.37℃孵育2分鐘,加入37℃預溫凝血活酶0.2ml;混勻,立即啟動秒表,記錄凝固時間,即為PT值.
3. 血凝儀測定:
請按儀器提供的參數操作
正常值:
1. 以時間表示11-15秒
2. 以PTD表示0.95-1.24
3. 以INR表示0.94-1.30 展開 |
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| 注意事項 | l. 采血必須使用一次性塑料注射器或硅化玻璃注射器,貯血必須使用塑料試管或硅化玻璃管不宜使用普通玻璃管,避免凝血因子活化.
2. 采血時止血帶不可束縛過緊并不應超過5分鐘,否則導致凝血及纖溶因子活化.
3. 血液應立即加抗凝劑,血漿制備必須及時,血漿分離應盡快去除血小板血漿分離后應盡快測定。
4. 血漿預溫不宜超過10分鐘.
5. 凝血活酶預溫不宜超過30分鐘。
6. 用濁度法測定終點的自動化凝血儀,溶血和較明顯的黃疸及脂血會影響測定結果,此時宜用手工法或電子機械或凝血儀測定.
7. 紅細胞比容超過55%或小于20%時,應調整抗凝劑用量,抗凝劑體積(ml)=0.00185×血液體積(ml)×(100-比容).
8. 不宜使EDTA-Na2. 肝素,草酸鹽抗凝,應使用0.109mol/L拘櫞酸鈉抗凝。
9. 一80℃及一20℃保存樣品,測定時37℃迅速融化,不可反復凍融.
10. 樣品采集避免溶血及組織液污染。
11. 建議各實驗室建立自己的參考值范圍。
12. 手工操作時,凝血酶原時間的終點計算以出現混濁的初期凝固為準.
13. 測定溫度36.5-38.5℃過低或過高溫度均使PT延長. 展開 |
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| 其他 | 因儀器/試劑不同,會得出不同結果,故很難統一規定參考值。各實驗室應根據自己的儀器、試劑等條件,自行測定一批健康人,建立參考值。此后至少每年或當條件有變化時,根據新的條件,重新建立。參考值PT測定的一切條件均應與患者血漿PT測定相同(包括采血、容器、抗凝劑等)。健康供血者應選至少20個18~55歲的男性和非妊娠、月經期女性,不可服藥,在平靜休息狀態采血、以減少個體差異(有條件時,可測一批老年人和小兒,分開統計)。同時應分開幾天采血和測定,以減少天間差異。測定結果經統計學處理,計算標準差:以兩個標準差(2SD)或95%可信限作為參考范圍。對于三個標準差是正常還是異常,需結合具體情況進行評估。從統計學上講,其中有些人是正常的。用以上標準,病人(PT異常)則很少會遺漏。 展開 |
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