（3）在開始收集洗脫液的同時檢查蛋白質是否已開始流出。為此，由每支收集管中取出1滴溶液置于黑色比色磁盤中，加入1滴20%磺基水楊酸，若呈現白色絮狀沉淀即證明已有蛋白質出現，直到檢查不出白色沉淀時，停止收集洗脫液。
（4）由經檢查含有蛋白質的每管中，取1滴溶液，放置在白色比色盤孔中，加入1滴奈氏試劑，若呈現棕黃色沉淀說明它含有硫酸銨。合并檢查后不含硫酸銨的各管收集液，即為“脫鹽”后的IgG。
注意：在檢測時，用皮頭滴管吸取管中溶液后應及時洗凈，再吸取下一管，以免造成相互污染假象。
試劑和器材
（1）Sephadex G-25。
（2）0.0175mol/L，pH6.7磷酸鹽緩沖液。
（3）奈氏（Nessler）試劑：于500ml錐形瓶內加入碘化鉀150g，碘110g，汞150g及蒸餾水100ml。用力振蕩7～15min，至碘的棕色開始轉變時，混合液溫度升高，將此瓶浸于冷水內繼續振蕩，直到棕色的碘轉變為帶綠色的碘化鉀汞液為止。將上清液傾入2000ml量筒內，加蒸餾水至2000ml，混勻備用。
（4）20%（W/V）磺基水楊酸溶液。
（5）1.5cm×20cm層析柱。
（6）黑、白比色磁盤。
附：凝膠處理的基本操作
（1）凝膠溶脹（水化）商品葡聚糖凝膠和聚丙烯酰胺凝膠均為干燥顆粒。使用前必須水化溶脹。商品瓊脂糖凝膠呈懸浮膠體可直接用，玻璃球不用溶脹。
凝膠溶脹有兩種方法：一種是將所需葡聚糖凝膠浸入蒸餾水中于室溫下溶脹；另一種是置于 水浴中溶脹。各種葡聚糖在上述溶脹方法中所需的時間見下表：
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型號溶脹時間（小時）20~25℃ 分離范圍（蛋白質，Mr） |
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G-103 至700 G-153 至1500 G-253 1000~1500 G-503 1500~3000 G-7524 3000~7000 |
必須浸泡足夠的時間以使凝膠充分溶脹。兩種方法中，沸 水浴溶脹不但節省時間，還可以殺滅凝膠中污染的細菌并排出網眼中氣體。
凝膠溶脹后，需用蒸餾水洗滌幾次，每次應將沉降緩慢的細小顆粒隨水傾倒出去，以免在裝柱后產生阻塞現象，降低流速。洗后將凝膠浸泡在洗脫液中待用。
一支層析柱中應該裝入的干膠量可以用下法推算：稱取1g所需型號的葡聚糖干膠，放在5ml量筒中，用室溫溶脹的方法充分溶脹，觀察溶脹后凝膠的體積。然后在層析柱中加水到所需柱床高度，將水倒出，量取柱床體積。根據1g干膠溶脹后的體積和所需柱床體積，即可推算出干膠的需要量。
（2）裝柱將層析劑裝入柱中進行層析的方法稱柱層析法。作層析用的柱子稱層析柱。層析柱有玻璃和透明塑料的兩種。柱子的一端為進口，另一端為出口，出口端底部有燒結玻璃砂板或尼龍布，能阻止層析劑流出，溶劑則可流過。如果沒有市售的層析柱，可以選用粗細均勻，長短合適的玻璃管，在兩端塞上合適的膠塞，膠塞中插人細玻璃管，在一端放一層尼龍布為出口，即可作為層析柱使用。層析柱的長短粗細根據實驗的目的而定，一般說來，凝膠層析時柱越長，分離效果越好。但柱過長，層析時間長，樣品易稀釋造成擴散，反而影響分離效果。柱的內徑不宜較細，直徑1cm以下的柱易發生“管壁效應”，即柱中部分的物質組分移動較快，管壁周圍的則移動較慢，造成分離混亂。當然柱的內徑也不宜過粗。
凝膠層析中，在把小分子物質（mw<1 500），如無機或其他物質與大分子物質（mw<20
000）分離時，層析柱的體積一般約為樣品的4–10倍，高度與直徑的比例為5：1至15：1之間。這類柱也稱為“脫鹽”柱，常用網孔很小的凝膠如G–25。用以將生物大分子物質彼此分開的分級層析柱，體積應為樣品體積的25～100倍。柱長度與直徑的比例為20：1～100：1。
裝柱的操作過程如下：將層析柱垂直固定在支架上，打開柱下口開關。將溶脹好的凝膠放在燒杯中，使凝膠表面上的水層與凝膠體積相等。用玻璃棒攪勻凝膠液，順玻璃棒灌入柱內。此時柱下口一邊排水，上口一邊加入攪勻的凝膠，可見凝膠連續均勻地沉降，逐步形成凝膠柱。當到達所需凝膠柱高度時，立即關閉下口，待凝膠自然沉降形成凝膠柱床。凝膠柱床一般應離柱頂3~5cm，并覆蓋一層溶液。