內切酶PCR反應中的活性

酶切反應條件如下：在20 μl PCR產物混合體系中加入5U的內切酶，按相應的反應溫度溫育1小時。通常20 μl PCR產物體系中含有1 μg底物DNA，1單位的Vent DNA聚合酶，1× ThermoPol Buffer [10 mM KCl， 20 mM Tris-HCl （PH 8.8@25°C），10 mM (NH₄)₂SO₄, 2 mM MgSO4和0.1% Triton X-100]，以及終濃度為200 μM的dNTPs。表中標記有*的內切酶在酶切反應前需加入NaCl（終濃度為100 mM）或相應的10× NEBuffer（1×終濃度）。

注意：在非最佳條件下進行酶切反應容易出現星號活性。要避免星號活性或希望取得更好的酶切效果，則需用乙醇沉淀純化DNA，再將其溶解于相應的酶切緩沖液。此外，如果使用不純的DNA聚合酶，會因其中混有其它核酸酶而影響整個反應結果。

+++表示完全切割；++表示約50%被完全切割；+表示約25%被完全切割。