1、生物素酶缺乏癥— 一般檢查
急性期血常規化驗常見全血細胞減少、粒細胞減少，穩定期常有貧血。急性期常見代謝性酸中毒、低血糖、高氨血癥、高乳酸血癥、電解質紊亂等。
2、生物素酶缺乏癥— 血液酰基肉堿譜檢測
3-羥基異戊酰肉堿增高，游離肉堿不同程度降低，一些患者丙酰肉堿、丙酰肉堿與乙酰肉堿比值增高。
3、生物素酶缺乏癥— 尿有機酸分析
急性期尿液3-甲基巴豆酰甘氨酸、乳酸、丙酮酸、3-羥基丙酸、3-羥基異戊酸、甲基檸檬酸濃度增高，穩定期可能正常。
4、生物素酶缺乏癥— 生物素酶活性檢測
白細胞、皮膚成纖維細胞生物素酶活性顯著降低或完全缺乏，部分生物素酶缺乏癥患者生物素酶活性為正常人的10%～30%，嚴重者低于正常人的1%。
5、生物素酶缺乏癥— 血清生物素濃度測定
血清生物素水平降低。
6、生物素酶缺乏癥— 基因檢測
BTD等位基因突變，可作為診斷依據。