實驗原理
凡能刺激機體產生抗體，并能與抗體發生特異性結合的物質稱為抗原。物質所具有的這種特性稱為抗原性（Antigenicity）。當機體受抗原刺激后，在體液中出現的一種能與相應抗原發生反應的球蛋白，稱免疫球蛋白（Immunoglobulin,
Ig）。含有免疫球蛋白的血清稱免疫血清。
醫學上常見的抗原物質，種類很多，如病原微生物及其代謝產物（毒素），異種動物血清（各種抗毒素，免疫血清的來源），同種血型抗原，同種異體皮膚，器官等組織抗原，自身組織抗原，腫瘤細胞抗原。具有抗原性的各種化學成分有蛋白質、脂蛋白、多糖體、脂多糖、糖蛋白、多肽以及核蛋白等，這些抗原物質均可刺激機體產生抗體或細胞免疫反應。
機體在抗原物質的刺激下產生特異性免疫反應的過程，大體上可分為3個階段。
1．致敏階段（加工處理抗原階段）：當顆粒性抗原初次進入人體內時，首先被巨噬細胞吞噬（可溶性抗原可直接被T淋巴細胞吞飲，多糖與鞭毛抗原物質可直接作用于B淋巴細胞）。通過巨噬細胞漿內溶酶體酶的作用，把抗原物質消化降解，而保留其抗原決定簇（特異性抗原成分）。經過加工處理的抗原分子結構比原來的小，抗原性卻比原來的加強。當處理過的抗原與巨噬細胞的RNA結合成為抗原-RNA
復合物（抗原信息），就具有強烈吸引免疫活性細胞的作用，能把抗原-RNA復合物傳遞給免疫活性細胞（Immunologically
competent cell）,啟動免疫反應。
2．反應階段（淋巴細胞分化增殖階段）：免疫活性細胞在受到抗原信息的刺激后，發生母細胞化，進而大量增殖。由于抗原的性質不同，刺激T細胞分化成致敏淋巴細胞。抗原信息刺激B細胞使分化成漿細胞。在分化過程中小部成為“記憶”細胞。由于“記憶”細胞的存在，即使抗原在漿內消失很久（數月至數年或更長）以后，仍能與再度進入體內的相應抗原迅速引起較強的免疫反應（回憶反應）。
3．效應階段（發生免疫反應階段）：當致敏淋巴細胞再次遇到相應抗原的刺激后，能釋放出多種具有生物活性的物質（淋巴因子），參與細胞免疫反應；漿細胞可形成各種類型的免疫球蛋白（抗體），參與體液免疫反應。
在免疫期間，不僅各個不同的動物，而且同一動物在不同的時間內抗血清效價、特異性、親合力等都可能發生變化，因而必須經常地采血測試。只有在對抗血清的效價、特異性、親合力等方面作徹底的評價后，才可使用所取得的抗血清。
抗血清的效價，就是指血清中所含抗體的濃度或含量。效價測定的方法常用的是放射免疫法，此法對所有的抗體均適用。某些由大分子（如蛋白類）抗原所產生的抗體，可用雙擴散等方法測定。本實驗采用雙向免疫擴散法測定效價。
試劑和器材
一、試劑
福氏（Freund）不完全佐劑：將液體石醋30毫升，羊毛脂10克混合后融化，分裝小瓶,經高壓滅菌后，保存于4℃備用。
福氏完全佐劑：在福氏不完全佐劑中于配制乳劑時加入卡介苗即為福氏完全佐劑，濃度為10 mg／m1。
1.5％的瓊脂糖：稱取1.5g瓊脂糖以巴比妥緩沖液(離子強度 0.05，pH8．6)配制,定容至100mL。
巴比妥緩沖液(離子強度0.05，pH8．6)：稱取巴比妥鈉10.3g, 加入1mol/L HCI8ml，混勻溶解，加蒸餾水至1000ml，用于配瓊脂糖凝膠用。
二、材料
健康家兔2－3只，年齡6個月以上，體重2－3kg。
三、器材
注射器，研缽，解剖用具，玻璃板，打孔器，大表面皿。
操作方法
一、抗血清制備
選擇健康家兔2－3只，年齡6個月以上，體重2－3kg，編號、標記。
二、胎甲球蛋白抗原乳劑的制備
取粗胎甲球蛋白制品（1－5mg/mL）1mL加等體積完全佐劑，按照配制佐劑的研磨法，在無菌條件下，制成乳白色粘稠的油包水乳劑。將值得的乳劑滴于冰水上5～10min內完全不擴散為止。
三、免疫方法
在選擇的家兔的四足掌處，剪去兔毛，經碘酒消毒，酒精脫碘后，皮內各注射
0.5mL抗原－福氏完全佐劑乳劑，以后每隔7－10天于兩肩后側及兩髖附近皮下多點注射抗原－福氏不完全佐劑，共2－3次，初步測出效價后，再進行一次加強免疫，即從耳靜脈注射抗原0.1－0.2mL，一周后放血。
四、抗血清的采集與保存
取兔血有兩種方法，一是耳緣靜脈或耳動脈放血，一是頸動脈入血，也可心臟采血。取動脈或靜脈放血時，剪去耳緣的毛，用少許二甲苯涂抹耳廓，30s后，耳血管擴張、充血。用手輕拉耳尖，以單面剃須刀或尖的手術刀片，快速切開動脈或靜脈，血液即流出，每次可收集30～40ml
。然后用棉球壓迫止血，凝血后洗去二甲苯。二星期后，可在另一耳放血。此法可反復多次放血。
頸動脈放血時，剪去頸部的毛，切開皮膚，暴露頸動脈，插管，放血。放血過程中要嚴格按無菌要求進行。
收集的血液置于室溫下1h左右，凝固后，置4℃下，過夜（切勿冰凍）析出血清，離心，4000rpm,10min。在無菌條件，吸出血清，分裝（0.05～0.2ml），貯于-40℃以下冰箱，或凍干后貯存于4℃冰箱保存。
五、抗血清效價的測定
用移液管量取溶化瓊脂糖放在干凈平皿或玻片上，約3mm厚，待其冷卻，完全凝固后，用打孔器打孔（圖4.7a）。中央孔內加適量抗原（容量為50μl），周圍各孔內分別加入50μl
1：2、1：4、1：8、1：16、1：32及不稀釋的抗血清，37℃下孵育24h，觀察有無沉淀線產生，以判斷血清的稀釋度（見圖4.7b）。
梅花型
（a）(b)
圖4.9 抗血清效價測定示意圖
注意事項
玻璃板必須仔細洗干凈，制膠板時放置水平，是制得的瓊脂板厚度均勻。