免疫過氧化物酶染色和免疫熒光有沒有很大區別
1、問:用免疫熒光方法做組織切片和培養細胞內的蛋白，兩者操作過程有哪些不同?
參考見解:只是固定方法不同。細胞固定用甲醇，切片固定用多聚甲醛，而染色方法是一樣的。
2、問:近期要做免疫熒光雙標，不知哪位有免疫熒光雙標技術的詳細步驟及其注意事項?
參考見解:我正在做冰凍組織切片的免疫熒光雙染。我的經驗是:
(1)選取一抗時要來源于兩種不同的動物，我用的是來源于rabbit和rat的抗體，二抗則是不同熒光信號標記的，我用的是donkey anti-rabbit-FITC(綠)和donkey anti-rat-Tex-Red(紅)。
(2)我的做法是兩種一抗（CHI抗體）同時孵育，然后兩種二抗同時孵育。抗體濃度、孵育時間要仔細摸索，我感覺一抗4度孵育過夜比較好，背景比較清晰。
(3)我的陽性對照用的是陽性組織切片，陰性對照則分別是家兔和大鼠的IgG，熒光標記物對照是PBS+熒光標記物。
(4)封閉血清與二抗來源動物一致，我用的是10%的正常donkey血清。
(5)其余步驟同一般免疫熒光單標操作。