實驗材料
1. 40 孔酶標板
2. 1:300 乙肝表面抗原溶液
3. 1:10 待測血清
4. 健康人血清
5. HBsAg 診斷血清
6. 辣根過氧化物酶標記羊抗人 IgG 抗體（酶標二抗）
7. 抗原稀釋液（ pH9.6 碳酸鹽緩沖液）
8. 洗滌液（ pH7.4 磷酸鹽—吐溫緩沖液）
9. 血清稀釋液（含 0.1% 牛血清白蛋白的磷酸鹽—吐溫緩沖液）
10. 底物顯色劑（鄰苯二胺—— H 2 O 2 溶液）
11. 終止液（ 2M H 2 SO 4 ）
實驗方法
1.包被抗原:用抗原稀釋液將HBsAg按1:300稀釋成工作濃度,加入到40孔酶標板1-9孔,每孔0.1ml。第10孔加稀釋液作空白對照。酶標板置濕盒內,4°C孵育過夜。
2 ．洗滌：次日,甩去酶標板中液體,每孔加洗滌液至滿,室溫放置3分鐘后,甩干,再加入洗滌液,重復3遍。目的在于去除未吸附的抗原,最后甩干。
3. 加待測血清：用血清稀釋液倍比稀釋待測血清，方法如下表：
每管取 0.1ml 分別加入到酶標板相應的 1~7 孔內。第 8 孔加入 0.1ml 健康人血清，作陰性對照。第 9 孔加入 0.1ml HBsAg 診斷血清，作陽性對照。酶標板置濕盒內， 37 ° C 孵育 30 分鐘。
4. 洗滌：甩干酶標板中的液體，用洗滌液按照步驟 2 中的方法洗滌 3 遍，最后甩干。
5 ．加酶標二抗：將稀釋好的酶標記羊抗人 IgG 抗體按每孔 0.1ml 加入 1~9 孔，第 10 孔仍只加 0.1ml pH7.4 磷酸緩沖液。酶標板置濕盒內， 37 ° C 孵育 30 分鐘。
6. 洗滌：同步驟 4 。
7. 加底物顯色：將新配制的鄰苯二胺—— H 2 O 2 溶液按每孔 0.1ml 加到 1~10 孔中，置濕盒 37 ° C 孵育或室溫靜置 10~15 分鐘。
8. 加終止劑一滴終止顯色反應。
結果判定
第 10 孔為空白對照孔，無色，主要用于酶聯免疫檢測儀的調零。
第 9 孔為陽性對照，顯棕黃色。
第 8 孔為陰性對照，無色（有時可因操作不精細或非特異性吸附而呈極淺的黃色）。
實驗孔（ 1~7 孔）中結果陽性者，呈棕黃色。隨著抗體量的遞減，顏色也逐漸變淺。
效價孔的判定，以與陰性對照孔有顯著性顏色差異的、血清稀釋度最高的實驗孔為效價孔，其血清稀釋度即為所測抗體的效價。
注意事項：
1. 實驗操作中，注意用于不同試劑的吸管、滴管不能混用，以免發生誤差而出現假陰性或假陽性結果。
2. 鄰苯二胺屬有毒化學物質，要避免和皮膚接觸。